乳及乳制品中硫氰酸根的測定
BJS 201709
1 范圍
本方法規(guī)定了離子色譜—電導檢測器檢測乳和乳制品中硫氰酸根的方法。
本方法適用于乳及乳制品（包括嬰幼兒配方乳粉，不包括特殊醫(yī)學用途嬰幼兒配方乳粉）中硫氰酸根的測定。
2 原理
樣品經過稀釋，乙腈沉淀蛋白后，過脫脂柱凈化，通過陰離子分析柱，根據分析柱對各離子的親和力不同而進行分離，進入電導檢測器進行檢測，外標法定量。
3 試劑和材料
除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T 6682中規(guī)定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1 乙腈（CH3CN)：色譜純。
3.1.2 45 mmol/L氫氧化鉀溶液：稱取2.52 g氫氧化鉀用水定容至1000 mL。
3.1.3 70 mmol/L氫氧化鉀溶液：稱取3.92 g氫氧化鉀用水定容至1000 mL。
3.2 標準品
硫氰酸鈉標準樣品的分子式、相對分子量、CAS登錄號見表1，純度≥99%。
3.3.1 標準儲備液：稱取硫氰酸鈉標準品（3.2）0.1397 g，用水溶解，定容至100 mL，硫氰酸根離子含量為1 000 mg/L。貯存于4 ℃冰箱中，有效期6個月。
3.3.2 標準應用液：準確吸取硫氰酸根離子的標準儲備液（3.3.1）1.0 mL于1 000 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，硫氰酸根離子含量為1.0 mg/L。貯存于4 ℃冰箱中，有效期3個月。
3.3.3 標準系列工作溶液：準確吸取硫氰酸根離子的標準應用液（3.3.2）0.0、2.0、4.0、10.0、20.0 mL于一組100 mL 的容量瓶中，用水定容至刻度，配得濃度分別為0.0、0.020、0.040、0.100、0.200 μg/ mL的標準系列溶液。現用現配。
3.4 聚二乙烯基苯聚合物反相填料（或等效的脫脂柱）：250 mg/3 mL，可采用商品化RP柱。
3.5 海砂。
4 儀器和設備
4.1 離子色譜儀（IC）：帶電導檢測器和抑制器，可進行二步梯度淋洗。
4.2 分析天平：感量分別為0.01 g和0.000 1 g。
4.3 冰箱：帶4 ℃冷藏。
4.4 超聲波清洗器。
5 分析步驟
5.1 樣品前處理
5.1.1 固體奶粉樣品
準確稱取樣品1 g（精確到0.01 g）于10 mL比色管中，加去離子水4 mL使充分溶解并混勻，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經過濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過濾，濾液直接上機分析。
5.1.2 液體奶樣品
準確量取樣品4 g（精確到0.01 g）于10 mL比色管中，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經過濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過濾，濾液直接上機分析。
5.1.3 奶酪等固體樣品
準確稱取樣品0.50 g（精確到0.01 g），加入1 g海砂（3.5）研磨均勻，轉移至10 mL比色管中，加水4 mL使充分溶解混勻，再加入乙腈（3.1.1）定容至刻度并混勻，超聲萃取15 min后，于4 ℃冰箱中靜置10 min以沉淀蛋白。取上清液1 mL至10 mL比色管中，用水定容至刻度，將稀釋后的溶液經過濾膜（水相，0.45 μm）和脫脂柱（3.4）過濾，濾液直接上機分析。
注：脫脂柱使用前依次用 10 mL 甲醇、15 mL 水通過，靜置活化 30 min。
5.2 離子色譜條件
5.2.1離子色譜柱參數：IonPac AS 16型陰離子分析柱 4 mm×250 mm (配備IonPac AG 16型陰離子保護柱 4 mm×50 mm)，或性能相當者。
5.2.2流速：1.0 mL/min。
5.2.3電導檢測器：配4 mm的陰離子抑制器。
5.2.4進樣量：100 μL。
5.2.5淋洗液：氫氧化鉀溶液（3.1.2和3.1.3）梯度洗脫，洗脫梯度見表2。
5.3 標準工作曲線制作
將標準工作溶液（3.3.3）按儀器參考條件（5.2）進行測定。以標準工作溶液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標繪制標準工作曲線。
硫氰酸根離子標準溶液色譜分離圖見附錄A。
5.4 樣品測定
取樣品處理液，儀器參考（5.2）進行測定，以保留時間定性，測量樣品溶液的峰面積響應值，采用外標法定量。樣品溶液中硫氰酸根的響應值應在標準線性范圍內。試樣待測液響應值若超出標準曲線線性范圍，應稀釋后進行分析。
6 結果計算
試樣中硫氰酸根的含量按式（1）計算獲得：
式中：
X — 試樣中硫氰酸根的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
C — 試樣中硫氰酸根峰面積對應的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
V — 試樣定容體積，單位為毫升（mL）；
m — 試樣的量，單位為克（g）；
f — 稀釋倍數。
計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。
7 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。
8 其他
按5.1樣品前處理中的稱樣量和處理方法檢測時，液體乳中硫氰酸根檢出限為0.25 mg/kg，定量限為0.75 mg/kg；乳粉中硫氰酸根檢出限為1.0 mg/kg，定量限為3.0 mg/kg；奶酪、奶油等乳制品中硫氰酸根檢出限為2.0 mg/kg，定量限為6.0 mg/kg。
附錄 A
圖A.1 0.2mg/L硫氰酸根離子標準溶液色譜圖
本方法負責起草單位：北京市食品安全監(jiān)控和風險評估中心（北京市食品檢驗所）。
驗證單位：中國檢驗檢疫科學研究院、北京市理化測試分析中心、寧夏回族自治區(qū)疾病預防控制中心、石家莊市疾病預防控制中心、吉林省衛(wèi)生監(jiān)測檢驗中心。
主要起草人：王琳琳、楊佳佳、孫海波、楊彥麗、耿健強、林立
編輯：姚紅
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