一、血液樣品的采集、保存和運送

1.血液采集和血清制取中應(yīng)注意問題。在血清學(xué)診斷中，診斷樣品主要是血清。對于不同的畜禽采血方法較多，通過實踐，一般家禽采用翅下靜脈采血、小豬采用臥式采血、中豬和大豬采用立式采血以及奶牛采用尾靜脈采血的方式，是畜禽應(yīng)激最小、最為方便的方式。在血清診斷中應(yīng)注意采血的時間，需在抗體的高峰期進(jìn)行血樣采集。

在血樣采集過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，針頭、血樣容器、采血部位須全部消毒。采樣人員務(wù)必熟練掌握采血技術(shù)，選用合適的注射器及針頭，做好保定工作，選準(zhǔn)采血進(jìn)針的部位。例如豬的前腔靜脈越往頭部越淺，但也越細(xì)；越靠胸部越粗，但也越深。在采血過程中要掌握好方向、角度和深度，針尖進(jìn)入血管后應(yīng)順著血管的方向向前推進(jìn)，推偏刺穿血管會引起血腫。

2.血清的制取。血清的制取通常有兩種方法：第一種自然析出法，采血后，應(yīng)使注射器活塞向后拉一兩厘米，留血清析出的空隙，并放在30度左右夾角上靜置，讓血清自然析出，通常溫度高血清析出快，夏日一般一個小時血清即可析出；另一種方法是離心法，該方法是立即將注射器內(nèi)的血液沿容器壁（血清管壁）徐徐注入，不能用力擠，也不能震蕩，否則易使紅細(xì)胞破裂而發(fā)生溶血，待容器內(nèi)的血液凝固后，用離心機(jī)4000轉(zhuǎn)5分鐘左右離心，上層即是血清，須凝血后再離心，否則離心出來是血漿。

3.血液樣品的保存和運送。血清制備后，應(yīng)4℃冷藏，在24小時內(nèi)送到實驗室。如24小時內(nèi)不能送達(dá)，則將血清置于冰箱-20℃凍存，切記不可反復(fù)凍融。樣品運輸過程中，為避免因劇烈震動使容器破損，樣品裝入冷藏箱前應(yīng)鋪設(shè)襯墊并用柔軟的東西互相隔開防止碰撞，而且要保持溫度在必要的范圍內(nèi)（通常加入冰袋）。需要注意的是所有盛裝送檢樣品的容器，應(yīng)貼上可防止因各種原因（冷凍、擠碰等）脫落的標(biāo)簽，同時填完整采樣單，標(biāo)明采樣時間、地點、編號和樣品名稱、畜禽品種、免疫情況等。

二、實驗室血清學(xué)診斷

1.試劑、器具的選擇。在血清學(xué)診斷中的試劑要選擇有批文批號的，并注意試劑的有效期。特別要注意的是診斷試劑的有效期通常比較短，甚至有的有效期只有3個月。化學(xué)試劑應(yīng)主要選擇分析純，并注意試劑的保存方法。另外，移液器量程的選用也要注意，因為其準(zhǔn)確性直接影響實驗結(jié)果。選用最大量程與所量體積最為接近的移液器，誤差會較小。在血清學(xué)檢測中經(jīng)常會用到96孔血凝板，通常豬瘟的間接血凝試驗選用110度V型板而禽流感和新城疫的血凝試驗選用90度V型板，因為在等時間內(nèi)不同型號的板血沉降效果是不同的。

2.實驗室儀器的校正。在血清學(xué)診斷中，常用的儀器有電子天平、水浴鍋、酶標(biāo)儀、純水器、滅菌鍋、移液器和恒溫箱。電子天平應(yīng)注意在一次使用、長時間未使用、天平移動位置和天氣溫差變化等情況下都要做校準(zhǔn)，才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。應(yīng)經(jīng)常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實測溫度是否一致，允許有±1℃的誤差。對酶標(biāo)儀應(yīng)經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測校正，使其保持良好的工作性能，因為不同試劑盒要求采用不同的波長。純水器應(yīng)注意器濾芯、反滲透膜和純化柱子是否超出使用壽命，如果失效，立即更換，否則影響純水的質(zhì)量。滅菌鍋的安全閥、溫度表、壓力表要定期校驗，以確保設(shè)備的安全和正常使用。移液器可用分析天平稱量所取純水的重量并計算的方法，來校正取液量。恒溫箱的電動機(jī)軸承應(yīng)每半年加油一次，經(jīng)常檢查恒溫箱所示的溫度和溫箱內(nèi)實測溫度是否一致。

3.實驗室操作的規(guī)范。實驗室操作的規(guī)范性，直接影響著實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。在血清學(xué)診斷中，一是應(yīng)注意所用的器皿都要洗凈，配好的溶液需要進(jìn)行滅菌，并注明日期和名稱，放置低溫或冷凍保存。二是所用的電子儀器設(shè)備在使用之前都應(yīng)提前10分鐘打開，讓儀器預(yù)熱，達(dá)到最佳的工作狀態(tài)。三是在移液器的使用時，為獲得的較高的精度，吸頭最好預(yù)先吸取一次樣品溶液，然后正式移液；吸液時應(yīng)保證槍頭內(nèi)沒有氣泡；每次實驗后務(wù)必將刻度調(diào)整至最大，讓彈簧恢復(fù)原型以延長移液槍的使用壽命。四是對于所用溶液和試劑，盡量做到取多少用多少，對于取出又未用完的溶液或試劑，絕不能倒回瓶中。五是實驗中應(yīng)注意控制好實驗環(huán)境溫度，通常溫度控制在20～25℃，對于特定的實驗要控制好相應(yīng)的實驗環(huán)境溫度。

4.實驗室檢測中的生物安全。作為基層獸醫(yī)實驗室，一般不從事高致病性病原微生物實驗活動，但是在做人畜共患病檢測（比如布魯氏菌病血清學(xué)檢測）時對實驗室工作人員仍有潛在危險，實驗室的其他血清學(xué)監(jiān)測的生物安全也有隱患。所以實驗室工作人員應(yīng)提高防護(hù)意識，懂得生物安全對自身和環(huán)境的重要性，而且在實驗時應(yīng)該做好防護(hù)措施。對于實驗室環(huán)境應(yīng)定期或不定期的通過紫外燈或消毒劑進(jìn)行消毒；每次實驗結(jié)束后都應(yīng)對實驗室、實驗臺面進(jìn)行消毒，廢棄物不能隨便丟棄，對其消毒后，做統(tǒng)一處理；對于個人，應(yīng)佩戴好手套、口罩、鞋套和實驗服，每次實驗結(jié)束都要洗凈雙手。

三、實驗室記錄

采樣記錄應(yīng)一式兩份，一份隨樣品送實驗室，一份采樣單位備案。通常血清學(xué)實驗的采樣記錄，包括以下幾方面的內(nèi)容：畜主的姓名、電話、畜禽場的地址、動物種類、數(shù)量、日齡和免疫情況。采樣記錄單一定要填寫詳實，因為它對實驗結(jié)果的分析起著很關(guān)鍵的作用。在實驗室血清學(xué)診斷中的實驗也應(yīng)做好原始記錄，記錄應(yīng)包括：檢測時間、樣品名稱、檢測項目、實驗方法、實驗設(shè)備、環(huán)境溫度和濕度、檢查結(jié)果以及檢查人員等。