遇秀玲：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)病理學(xué)博士，曾任軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心副研究員，中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心病理室主任，長(zhǎng)期從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病理檢測(cè)研究工作。

問題一：為什么藍(lán)耳病在許多場(chǎng)，經(jīng)常是免疫或不免疫都有發(fā)病很嚴(yán)重，帶來很大損失？

我想不光是藍(lán)耳病，在我國(guó)豬病都有一個(gè)共性問題，就是診斷的問題。很多豬場(chǎng)發(fā)病在臨床現(xiàn)場(chǎng)一看就診斷，或?qū)嶒?yàn)室一檢出藍(lán)耳病毒就診斷為藍(lán)耳病了。這里要強(qiáng)調(diào)的是：藍(lán)耳病毒的檢出 ≠ 藍(lán)耳病的存在。

病是一個(gè)因病原造成臨床影響的過程，而病原可以是潛伏在體內(nèi)，呈持續(xù)帶毒狀態(tài)，未見得一定有臨床問題。另一方面，藍(lán)耳病現(xiàn)在大部分用活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的時(shí)間內(nèi)都是可檢出的，所以檢出的病毒如果不做鑒別檢驗(yàn)，可能會(huì)造成臨床上的誤診。

問題二：臨床上很多豬群檢出藍(lán)耳病毒已經(jīng)是常態(tài)，那么如何判斷這個(gè)豬場(chǎng)因?yàn)樗{(lán)耳病毒的存在造成了疫情呢？

第一，在最近沒有免疫的情況下，使用雙份血清的評(píng)價(jià)方式。

即豬場(chǎng)一直在持續(xù)監(jiān)測(cè)的狀態(tài)下，當(dāng)感到臨床不穩(wěn)定時(shí)采血檢測(cè)，和原來監(jiān)測(cè)時(shí)的檢測(cè)結(jié)果對(duì)比。如果不穩(wěn)定時(shí)血清PRRSV抗體值突然升高，一下子有較大的變化，可以考慮是藍(lán)耳病毒帶來的影響。

第二，在一個(gè)場(chǎng)疫情的早期，對(duì)早期有代表性的發(fā)病豬及時(shí)剖檢、采樣送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)診斷。

如果不是在疫情早期采樣，或者已經(jīng)采用了各種方法治療一段時(shí)間后再去做檢測(cè)，可能得出的診斷結(jié)論就會(huì)是多種病原混合感染，而不是這次疫情的病原。可能現(xiàn)實(shí)中多數(shù)情況是，這個(gè)發(fā)病群等到檢測(cè)結(jié)果出來了再去采取措施控制已經(jīng)來不及了。其實(shí)可以在發(fā)病初期在采樣檢測(cè)同時(shí)根據(jù)臨床判斷采取控制措施。這樣等診斷結(jié)果出來了，就算之前的判斷錯(cuò)誤，也可以證實(shí)本次發(fā)病的原因是什么，對(duì)今后的疫情防控也是有指導(dǎo)意義的。

問題三

藍(lán)耳病檢測(cè)采樣的靶組織和靶器官應(yīng)該是哪些呢？

對(duì)藍(lán)耳病來說血樣是很好的靶樣品，另外我們應(yīng)該對(duì)發(fā)病過程中臨床上有代表性的豬只進(jìn)行剖檢，采取病毒檢出率高的靶組織（藍(lán)耳病毒除了血液，扁桃體和肺是最重要的靶器官外，在肺門淋巴結(jié)和下頜淋巴結(jié)也可以檢出）。

作為藍(lán)耳病毒，其最重要的靶組織就是扁桃體和肺臟，血液作為最容易采集的樣品，在藍(lán)耳病的檢出中意義也是非常大的。血液中病毒檢出時(shí)間較早，一般感染后3天左右就能從血液中檢出，同時(shí)持續(xù)的時(shí)間也非常長(zhǎng)，可以達(dá)到2-3個(gè)月，所以作為活體檢測(cè)，血是最好的。作為死亡剖檢動(dòng)物來說，扁桃體和肺臟是最重要的靶器官。

問題四

關(guān)于藍(lán)耳病如何做鑒別診斷，耳朵發(fā)藍(lán)就一定是藍(lán)耳病嗎？在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)上如何區(qū)分高藍(lán)和經(jīng)典毒株？

并不是耳朵發(fā)藍(lán)一定是藍(lán)耳病，末梢循環(huán)障礙時(shí)耳朵都會(huì)發(fā)藍(lán)。

藍(lán)耳病有一個(gè)典型的癥狀，就是眼結(jié)膜炎，開始可能是漿液性的，后面可能會(huì)發(fā)展成粘液性的。高致病性藍(lán)耳病時(shí)20-40%的豬有神經(jīng)癥狀，因?yàn)樗{(lán)耳病毒在后期會(huì)進(jìn)入到腦組織中，造成一些神經(jīng)癥狀，可以看到運(yùn)動(dòng)障礙、抽搐、后軀麻痹等。扁桃體出血、潰瘍，肺組織實(shí)變。在敗血癥時(shí)可看到脾臟腫大淤血、梗死灶，但是這種腫大與豬瘟以及一些細(xì)菌性疾病時(shí)我們看到的脾腫是有區(qū)別的，除非后續(xù)繼發(fā)細(xì)菌感染，單一病毒造成的損傷是不太容易看到那種脾臟極度腫大的。

臨床上近年來在PRRSV鑒別檢驗(yàn)這塊要做的工作很多。我們檢測(cè)藍(lán)耳病毒所用的PCR方法可能是各種各樣的，有些可能直奔高致病藍(lán)耳病毒的檢測(cè)去了，有些可能檢測(cè)的是經(jīng)典藍(lán)耳。事實(shí)上，在所有的病原檢測(cè)方法里，沒有所謂針對(duì)經(jīng)典藍(lán)耳病毒的，只有藍(lán)耳病毒通用的RT-PCR。因?yàn)樗{(lán)耳病毒通用檢測(cè)方法是針對(duì)藍(lán)耳病毒最保守的片段設(shè)計(jì)的引物，而引物不同靈敏度也不同，作為藍(lán)耳病毒的檢測(cè)方法來說，使用最保守片段引物是最靈敏的，我們用的通檢RT-PCR就是這樣的方法。

比如使用通檢的RT-PCR方法檢出十個(gè)樣品里面有八個(gè)陽(yáng)性，而用檢變異株RT-PCR方法（引物），十個(gè)里面檢出六個(gè)原來陽(yáng)性較強(qiáng)的樣品。不是說漏掉的那兩個(gè)弱陽(yáng)性就是經(jīng)典株，是因?yàn)閮煞N方法的靈敏度不同造成那兩個(gè)弱陽(yáng)性樣本就沒有被檢出，假如送去測(cè)序它們有可能都是變異株。所以說使用通檢RT-PCR方法只能告訴你檢出來是藍(lán)耳病毒陽(yáng)性，而不能確定是哪個(gè)毒株。而接下來再用檢變異株的RT-PCR方法檢顯示一部分陽(yáng)性一部分陰性，是因?yàn)楹笠环N方法靈敏度比通檢的方法低，原來強(qiáng)陽(yáng)性的現(xiàn)在檢出是陽(yáng)，弱陽(yáng)性的檢出就是陰了，而不能說那一部分變?yōu)殛幮缘木褪墙?jīng)典株。

有些場(chǎng)檢出藍(lán)耳既有高致病的也有經(jīng)典的，有可能是因?yàn)闄z測(cè)方法靈敏度不同造成的對(duì)檢測(cè)結(jié)果的理解誤區(qū)。在通檢陽(yáng)性的結(jié)果下，需要再做鑒別檢驗(yàn)才能告訴你這個(gè)毒株是什么類型。

問題五

藍(lán)耳病與臨床癥狀相似的疾病如何做鑒別診斷？

對(duì)臨床癥狀相似或相同的病做鑒別診斷，這點(diǎn)非常重要。有些場(chǎng)在臨床診斷上，把其他疾病引發(fā)的癥狀歸結(jié)到藍(lán)耳病上。比如2012年在偽狂犬流行毒株造成的豬偽狂犬爆發(fā)場(chǎng)，發(fā)病豬肉眼看到與高致病性藍(lán)耳病相似的肺實(shí)變，但是做成組織切片就發(fā)現(xiàn)，情況大相徑庭。病豬肺臟在組織學(xué)上看到的是壞死灶，這是偽狂犬的典型病變，因?yàn)閭慰袢【褪且栽钚詨乃罏榻M織學(xué)特點(diǎn)。但是藍(lán)耳病毒主要在肺泡2型細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖，肺組織除了間質(zhì)性肺炎沒有其他變化。之后在肺免疫組化染色中檢出的是偽狂犬病毒而沒有藍(lán)耳病毒。這些臨床表現(xiàn)相似的疾病在組織學(xué)中可以清晰的做區(qū)分。

問題六

現(xiàn)在在藍(lán)耳病毒的檢測(cè)中還需要區(qū)別野毒和疫苗毒，那么豬場(chǎng)如何去區(qū)分是野毒感染還是疫苗毒，以及如何評(píng)價(jià)打苗以后的結(jié)果？怎么去做檢測(cè)？

實(shí)際上藍(lán)耳病毒的抗體檢測(cè)方法有很多，但是對(duì)現(xiàn)在大規(guī)模樣品檢測(cè)來說，ELISA是一個(gè)相對(duì)方便能夠在臨床上推廣應(yīng)用的方法。ELISA方法有很多商品化試劑盒，在國(guó)內(nèi)用的最多的是兩類。一類是N蛋白包被的試劑盒，一類是糖蛋白包被的試劑盒。那么這兩類試劑盒的蛋白包被是一個(gè)什么關(guān)系呢？與病毒免疫原性相關(guān)性更好的是膜上的糖蛋白，而病毒感染首先激發(fā)的是跟核酸相關(guān)的N蛋白。

那么在臨床下什么情況下該選什么蛋白包被的試劑盒呢？N蛋白激發(fā)抗體產(chǎn)生時(shí)間很早，如果是一個(gè)沒有感染過藍(lán)耳病的地區(qū)或場(chǎng)，一定是用N蛋白來做防控預(yù)警。還有就是做雙份抗體的檢測(cè)，一旦出現(xiàn)N蛋白抗體在沒有免疫的情況下出現(xiàn)一個(gè)跳升，一定和藍(lán)耳病毒感染發(fā)病相關(guān)性很大。

而作為疫苗的免疫效果的，則與糖蛋白相關(guān)性大，N蛋白產(chǎn)生的抗體只代表是不是有感染，與中和抗體及攻毒保護(hù)結(jié)果相關(guān)性不大。N蛋白抗體出現(xiàn)早，但是持續(xù)時(shí)間相對(duì)短，且與免疫保護(hù)相關(guān)性較小。糖蛋白抗體產(chǎn)生時(shí)間晚，且持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，與免疫保護(hù)相關(guān)性更好，所以通常用它來做免疫后抗體水平監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)豬群是否處在保護(hù)狀態(tài)。

PRRSV主要蛋白的作用

注：使用上述不同蛋白作為包被抗原的ELISA試劑盒，在臨床上可用于不同免疫和感染背景的豬群。