• 文/《豬病學(xué)》第11版

• 譯/ 豬倌張軍

非洲豬瘟

原作者：JoséManuelSánchez‐Vizcaíno,AlbertoLaddomada,andMarisaL

歷史回顧

全球非洲豬瘟（ASF）第一例報(bào)道是在1921年，當(dāng)時(shí)該病(ASF)從非洲野豬傳給家豬，造成100%豬只死亡(Montgomery,1921)。從這以后，ASFV已三次傳出非洲。第一次發(fā)生在1957年，從安哥拉到達(dá)葡萄牙里斯本(Manso-Ribeiro等,1958年)。第二次(1960)是同樣是從非洲到里斯本,然后到西班牙和其他歐洲國家,包括法國(1964)、意大利(1967、1969)、撒丁島(1978)、馬耳他(1978)、比利時(shí)(1985年)和荷蘭(1986年)。ASFV從歐洲蔓延到拉丁美洲，包括古巴(1971、1980)、巴西(1978)、多米尼加共和國(1978)和海地(1979)。隨后,除了葡萄牙、西班牙外和撒丁島，所有這些國家都根除了ASFV。葡萄牙和西班牙在1995年之前一直處于地方性流行；撒丁島至今仍是地方性流行。第三次ASFV傳出非洲發(fā)生于2007年,這一次到達(dá)了高加索地區(qū),并蔓延至俄羅斯聯(lián)邦(2007)、烏克蘭(2012)、白俄羅斯(2013)，于2014年到達(dá)波羅的海區(qū)域和波蘭,于2017年和2018年向西傳播到中歐和西歐。2018年8月,ASF首次報(bào)道發(fā)生在中國。所有這些國家目前仍然處于感染狀態(tài)。

目前ASFV的流行狀況已嚴(yán)重威脅動物健康和生豬生產(chǎn)，對感染國家和鄰近國家的經(jīng)濟(jì)造成損失。ASFV在非洲大陸許多撒哈拉以南地區(qū)仍然處于地方性流行。

公共衛(wèi)生

ASFV不感染人，不會對公共衛(wèi)生造成直接危害(EFSA,2009)。但是,ASFV對豬及豬產(chǎn)品的交易，對和食品安全，特別是那些以豬肉作為主要蛋白來源的國家造成嚴(yán)重的社會和經(jīng)濟(jì)影響。

病原學(xué)

ASFV是一個(gè)復(fù)雜的二十面體DAN病毒，是非洲豬瘟病毒科，非洲豬瘟病毒屬的唯一成員(Dixon等，2005)。該病毒由四層同心軸結(jié)構(gòu)和一個(gè)六角形外膜組成(圖25.1)，六角形外膜由病毒穿過細(xì)胞膜出芽時(shí)形成(Salas和Andrés,2013)。ASFV復(fù)制主要發(fā)生在受感染巨噬細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中,雖然細(xì)胞核內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了病毒的早期復(fù)制。

病毒基因組的長度從170kb到193kb不等，包含150–167開放閱讀框架。基因組由一個(gè)125kb左右的保守中心區(qū)域和兩個(gè)編碼五個(gè)多基因家族（MGFs）的可變末端組成(Ya?ez等,1995年)。MGFs中長達(dá)20kb的區(qū)域，是基因刪除和插入的區(qū)域，這些區(qū)域可能有助于產(chǎn)生抗原變異,從而幫助ASFV逃避宿主免疫系統(tǒng)。

病毒基因型和亞型是根據(jù)保守中心區(qū)的的中心可變區(qū)(CVR)中的微小變化來區(qū)分的。完整的基因組序列適用于目前15株非洲和歐洲ASFV分離株,這些毒株來自不同的地區(qū)和宿主(家豬、疣豬和軟蜱)。這些分離毒株表現(xiàn)出不同程度的毒力和明顯的遺傳差異(DeVilliers,2010)。MGF區(qū)域內(nèi)的序列變化,與巨噬細(xì)胞的毒力水平和與軟蜱的宿主范圍有關(guān)(Burrage等,2004;Zsak等,2001)。

ASF病毒粒子極其復(fù)雜:雙向電泳表明細(xì)胞內(nèi)至少有28個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白顆粒,細(xì)胞外至少有54種純化蛋白顆粒。超過100種病毒誘導(dǎo)蛋白質(zhì)從被感染的豬巨噬細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)(Esteves等1986)。黏附蛋白p12和p24在病毒粒子的細(xì)胞外膜發(fā)現(xiàn)，而蛋白p150、p37、p34和p14位于病毒核內(nèi)。病毒外膜還包含血凝素(HA)蛋白(細(xì)胞的病毒同源體，CD2),病毒中唯一已知的糖蛋白。某些ASFV蛋白具有高度抗原性,包括病毒衣殼的主要結(jié)構(gòu)成分(P72)以及膜蛋白(P54、P30和P12)。

圖 25.1 ASFV病毒粒子的電子顯微鏡。來源：由 CBM-CSIC-UAM 提供

50多種病毒蛋白在感染豬或康復(fù)豬誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。它們在血清學(xué)診斷是有用的抗原,雖然其誘導(dǎo)的保護(hù)免疫還不清楚(Neilan等,2004)。

ASFV不能誘導(dǎo)完全的中和抗體免疫反應(yīng),導(dǎo)致無法根據(jù)血清型進(jìn)行分類。但是基于P27基因的部分核酸序列，ASFV可分為24種基因型(Achenbach等,2017;Quembo等,2017)。亞型是根據(jù)B602L基因內(nèi)的CVR的串聯(lián)重復(fù)序列的分析來區(qū)別(Nix等,2006)，同樣根據(jù)基因組右端的I73R和I329L基因也可以進(jìn)行亞型的分類(Gallardo等,2014)。編碼p54、p30或HA的基因組可運(yùn)用于病毒跟蹤。

所有24種已知的ASFV基因型都已在撒哈拉以南的非洲確認(rèn)(Achenbach等,2017;Quembo等,2017年)。2006年之前在歐洲和西半球檢測到的ASFV分離株僅限于基因I型，來自西非。2007年,在歐洲整個(gè)高加索地區(qū)，檢測到了來自非洲東南部新的ASFV基因II型(EFSA,2010)。

ASFV在pH值4–10下，在無血清培養(yǎng)基中保持穩(wěn)定,但pH值低于4或者高于11.5，病毒幾分鐘內(nèi)就會被滅活(EFSA, 2010)。該病毒在 5°c (41°F)血清中下可保持存活6年，并能在PH值13.4條件下，25% 的血清培養(yǎng)基下存活數(shù)日。ASFV 通過加熱在60°c (140°F) 30分鐘 (Plowright和 Parker,1967)或 56°c (133°F) 70分鐘(Mebus,1988)可被滅活。許多有機(jī)溶劑可以通過破壞囊膜使病毒失活，但ASFV能夠抵抗蛋白酶和核酸酶降解 (Plowright 和 Parker,1967)。

ASFV田間分離毒株必須通過豬的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分離鑒定，病毒在普通細(xì)胞中不能復(fù)制。為了研究目的，多株ASFV已經(jīng)在非洲綠猴腎穩(wěn)定細(xì)胞系中適應(yīng)生長，包括VERO、MS 和 CV‐1細(xì)胞。最近，多個(gè)豬單核細(xì)胞起源的細(xì)胞系已經(jīng)開發(fā)用于研究(Chitko-mckown 等, 2013;Hurtado 等, 2010)。例如, COS‐1細(xì)胞系是已用于田間分離株的檢測、生長和滴度測定，以及實(shí)驗(yàn)室工程ASFV毒株傳代。盡管取得了這一進(jìn)展, 但一個(gè)合適的細(xì)胞系尚未分離或開發(fā)出來，病毒或潛在的實(shí)驗(yàn)疫苗可以在其中復(fù)制的細(xì)胞系, 而無需改變其基因組的免疫原性。這仍然是 ASFV 研究和疫苗研發(fā)的一個(gè)重大障礙。

流行病學(xué)

ASF已在撒哈拉以南地區(qū)的25個(gè)非洲國家流行,存在不同的流行特點(diǎn)。在歐洲, ASF 在撒丁島(意大利) 和東歐一些地區(qū)流行 (Gogin等,2013)。2007年6月,ASF在格魯吉亞爆發(fā)疫情后 在高加索發(fā)現(xiàn)了這種病毒。隨后疫情蔓延至亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯聯(lián)邦, 抵達(dá)與烏克蘭的邊境及俄羅斯西北部的波羅的海和巴倫支海附近。自2011年以來, ASF擴(kuò)散到西北部, 到達(dá)俄羅斯聯(lián)邦新的地區(qū) (莫斯科周圍)、烏克蘭 (2012年)、白俄羅斯 (2013年)、愛沙尼亞 (2014年)、拉脫維亞 (2014年)、立陶宛 (2014年)、波蘭 (2014年)、摩爾多瓦(2016年)、捷克共和國 (2017年)、羅馬尼亞 (2017年)、匈牙利(2017年)、保加利亞 (2018年)、比利時(shí) (2018年)。從2018年8月開始, ASF 已迅速擴(kuò)展到中國許多省份和城市。歐洲東部爆發(fā)ASFV是由非洲東南部流行的單一基因II入侵到歐洲引起的。從眾多的東歐國家分離到非洲豬瘟毒株發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)基因變異 (Gallardo等, 2014)。疫情造成的死亡率逐漸發(fā)生變化，抗體陽性或非典型癥狀的存活豬逐漸增多。這一現(xiàn)象與歐洲某些地區(qū)發(fā)現(xiàn)的中等毒力毒株至少存在一定關(guān)聯(lián)(Gallardo等, 2018)。

ASFV的天然宿主是野豬和家豬。歐洲野豬比較容易被ASFV感染，表現(xiàn)的臨床癥狀和死亡率與家豬很相似(McVicar等, 1981; Sánchez‐Botija,1982).。相反，有三種非洲野豬可以陰性帶毒，成為病毒儲存器，這三種豬分別是疣豬，巨林豬和非洲叢林野豬(De Tray 1957)。

在非洲，ASFV的傳播有一個(gè)比較復(fù)雜的循環(huán)模式，包括非洲野豬、軟蜱和家豬。在東部和南部地區(qū)，病毒傳播遵循一個(gè)古老的森林循環(huán)模式，涉及軟蜱和感染無癥狀的疣豬和叢林豬。在地方性流行地區(qū)發(fā)現(xiàn)了另外兩種的傳播方式，一種是沒有疣豬參與的家豬/蜱傳播方式，另一種是豬/豬傳播方式。

在歐洲，健康動物包括家豬和野豬與蜱的直接接觸傳播是最常見的傳播途徑。ASFV在家豬中的傳播通過口、鼻傳播(Colgrove 等,1969)。豬還有其他感染的方式，比如說蜱的叮咬(Plowright 等,1969)，皮膚的傷口和注射途徑（肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、靜脈注射）(McVicar 1984)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在伊比利亞半島, 撒丁島和歐洲東部存在歐洲野豬的自然感染。野豬在目前東歐的 ASFV 傳播和存留發(fā)揮重要作用，原因尚不清楚 (EFSA, 2015年)。與此形成鮮明對比的是，在西班牙和葡萄牙, 野豬并不是一個(gè)主要的ASFV帶毒群體, 并沒有對病毒根除構(gòu)成主要障礙。不同之處可能是野豬密度比過去高得多(Arias和Sánchez-vizcaíno2002)。撒丁島的證據(jù)表明，如果該病在某同一地區(qū)從家豬中被根除，那么該病也會從野豬群體中消失 (Addomada等,1994)。多種軟蜱都是ASFV的攜帶者和傳播者，包括非洲鈍緣蜱(Plowright等,1969)和伊比利亞半島的游走鈍緣蜱(Sánchez‐Botija,1963)。在伊比利亞半島的還會有像游走鈍緣蜱這樣的生物攜帶者發(fā)生的間接傳播，尤其是戶外養(yǎng)豬生產(chǎn)。這些病毒攜帶者在東歐的危害還不清楚。通過比較在歐洲和非洲軟蜱對ASFV的復(fù)制，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)疾病流行病學(xué)方面的重要區(qū)別。在非洲，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)ASFV通過游走鈍緣蜱經(jīng)卵或經(jīng)期傳播 (Plowright等,1970),歐洲只發(fā)現(xiàn)經(jīng)期傳播。在非洲，游走鈍緣軟蜱能夠在實(shí)驗(yàn)條件下將ASFV傳播給家豬 (Mellor 和Wilkinson,1985)，在田間條件下還沒有發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象。在南美和北美廣泛分布的許多種類的蜱都能攜帶和傳播ASFV(Groocock 等,1980)。經(jīng)過測驗(yàn)，所有種類的鈍緣蜱都對ASFV易感 (EFSA,2010)。ASFV的潛伏期是4-19天，這取決于它的種類以及傳播的途徑。

被野毒株感染的家豬在潛伏期即在臨床癥狀顯現(xiàn)之前就向外界排毒。觀察到臨床表現(xiàn)之后，ASFV能夠通過分泌物和排泄物使排毒達(dá)到高峰，包括鼻涕、唾液、糞便、尿液、結(jié)膜滲出物、生殖器排泄物和傷口流出的血液。同時(shí)，康復(fù)豬能保持高抗體水平和長時(shí)間的病毒血癥，而且病毒能在組織中存活數(shù)周至數(shù)月。因此，一旦ASFV感染家豬存活下來，帶毒家豬就會變成該病重要的傳染源，所以在ASFV撲殺中是重點(diǎn)考慮對象。非洲野豬中感染ASFV時(shí)組織中含有較低滴度的病毒，病毒血癥不明顯或檢測不到(Plowright,1981)。宿主的遺傳因素和免疫應(yīng)答反應(yīng)可能與與這種低病毒載量有關(guān)，但還不清楚。這類病毒量已經(jīng)足夠通過軟蜱傳播家豬，但卻不能引起豬群間的相互感染。這樣的傳播方式使得非洲境內(nèi)根除ASFV非常困難。

ASFV在環(huán)境中比較穩(wěn)定，能夠在污染的豬欄中保持感染性超過3天，在豬的糞便中保持感染性能達(dá)到數(shù)周。ASFV能夠在室溫保存的血清或血液中存活18個(gè)月，在腐爛的血液中存活15周(EFSA,2009)。ASFV能夠在冰凍肉或生肉中存活數(shù)周至數(shù)月。在腌制處理的產(chǎn)品，比如帕爾馬火腿，經(jīng)過300天的腌制處理后就不會發(fā)現(xiàn)有感染性的病毒(McKercher 等,1987)。西班牙腌制的豬肉產(chǎn)品，比如賽拉諾火腿和肘子，經(jīng)過140天就不會存在ASFV，伊比利亞里脊經(jīng)過112天不含ASFV(Mebus等,1993)。70°C (158°F)制成的熟的或者罐頭火腿中從沒有發(fā)現(xiàn)過有感染性的ASFV。ASFV在去骨肉，含骨肉、絞肉里110天就會失去感染性，在煙熏的去骨肉里面30天就會失去感染性(Adkin等,2004)。ASFV在脂質(zhì)溶劑、洗滌劑、氧化劑里面很容易失活，例如次氯酸鹽和苯酚，還有一些對時(shí)間和溫度比較依賴的商業(yè)性的消毒劑。例如ASFV與2.3%的氯和3%的鄰苯基苯酚，或者合成的碘溶液接觸30分鐘就會失活。其他使ASFV失活的有效藥劑包括福爾馬林、氫氧化鈉、丙內(nèi)酯、甘油醛和乙酰亞乙胺 (EFSA 2010)。總之，肥皂、洗滌劑、堿性物質(zhì)對畜舍、器具、衣物、車輛、人類居所消毒非常有效。飛機(jī)上的消毒劑推薦使用Virkon®（衛(wèi)可）。被病毒污染的飼料、飲水和糞肥應(yīng)該被掩埋或焚燒。被ASFV污染的豬糞在4°C(39°F)可以用1%的氫氧化鈉或氫氧化鈣處理3分鐘或0.5%的氫氧化鈉或氫氧化鈣處理30分鐘。撲殺蜱蟲建議使用殺蟲劑（有機(jī)磷脂類和合成的擬除蟲菊酯）。

【未完，明天待續(xù)】

參考文獻(xiàn)(略)