• 文/《豬病學(xué)》第11版

• 譯/ 豬倌張軍

  非洲豬瘟

  JoséManuelSánchez‐Vizcaíno,AlbertoLaddomada,andMarisaL

致病機(jī)理

ASFV主要在病毒入侵部位附近淋巴結(jié)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制。經(jīng)口感染時，病毒首先在扁桃體和下頜淋巴結(jié)的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，然后經(jīng)血液和/或淋巴轉(zhuǎn)移至病毒二次復(fù)制的場所-淋巴結(jié)、骨髓、脾、肺、肝和腎。病毒血癥通常在感染后4-8天出現(xiàn)，由于缺乏中和抗體，將持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。

ASFV主要在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中復(fù)制(Mínguez等,1988)，也會在內(nèi)皮細(xì)胞(Wilkinson和 Wardley,1978)、肝細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞 (Gómez‐Villamandos等,1995)和中性粒細(xì)胞(Carrasco等,1996)復(fù)制。目前還沒有發(fā)現(xiàn)在B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞復(fù)制。病毒進(jìn)入易感細(xì)胞是通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(Alcamí等,1989)，然后在細(xì)胞核附近的不同細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制。ASFV在單核細(xì)胞和衍生的巨噬細(xì)胞亞群中的相互作用研究表明，病毒具有抵消巨噬細(xì)胞活性反應(yīng)的進(jìn)化機(jī)能，從而促進(jìn)病毒的存活，在宿主中傳播，造成ASFV發(fā)病 (Franzoni等,2017)。ASFV易于血液細(xì)胞膜(Quintero等,1986) 和血小板 (Gómez‐Villamandos等,1996)相互作用，能夠引起感染豬的血細(xì)胞吸附現(xiàn)象。但有些分離毒株不會誘導(dǎo)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象。

急性病例中的出血機(jī)理是由于疾病后期，在內(nèi)皮細(xì)胞中復(fù)制的病毒使內(nèi)皮細(xì)胞的吞噬活性增強(qiáng)引起的。相反，亞急性病例的出血機(jī)理主要是因?yàn)檠鼙诘耐ㄍ感陨叨鸬?(Gómez‐Villamandos等,1995)。急性病例中淋巴細(xì)胞減少的機(jī)理與淋巴器官的T區(qū)淋巴細(xì)胞凋亡有關(guān) (Carrasco等,1996)，這種凋亡并非發(fā)生在病毒復(fù)制過程中，因?yàn)檫€沒有證據(jù)表明ASFV能在T細(xì)胞和B細(xì)胞中復(fù)制。但可能涉及其他機(jī)制，例如，ASFV感染的巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子或細(xì)胞凋亡因子(Oura等,1998)。

亞急性非洲豬瘟表現(xiàn)為暫時性血小板減少 (Gómez‐Villamandos等,1996)。ASFV急性和亞急性的后期可觀察到肺泡水腫，是ASFV致死的主要原因，這種水腫是肺血管內(nèi)巨噬細(xì)胞的活化造成的(Sierra等,1990)。

臨床癥狀

非洲野豬對該病有很強(qiáng)的抵抗力，一般不表現(xiàn)出臨床癥狀。不管是急性還是慢性感染，家豬和歐洲野豬表現(xiàn)有明顯的臨床癥狀，ASF的臨床癥狀和許多其他豬的疾病類似，特別是豬瘟（豬霍亂）和豬丹毒。

ASFV自然感染的潛伏期為4-19天。在實(shí)驗(yàn)條件下，潛伏期可以縮短為2-5天，潛伏期的長短與接種的劑量和接種的途徑有關(guān)(Mebus等,1983)。ASF臨床表現(xiàn)取決于該毒株的毒力、接觸時間、感染的途徑。高毒力毒株導(dǎo)致超急性和急性發(fā)病，中等毒力造成多種臨床癥狀：急性、亞急性、和慢性或不明顯癥狀。低毒力毒株造成亞急性、慢性、或不明顯的發(fā)病。

發(fā)病率在40-85%之間，取決于該毒株是引起急性還是慢性發(fā)病，病毒毒力，感染途徑和是否存在出血（上位顯性或者是出血性腹瀉）。高毒力死亡率可高達(dá)90-100%，中毒力能引起20-40%的死亡率，在幼年動物能引起70-80%的死亡率，低毒力能造成10-30%的死亡率。

超急性

ASF 的超急性特點(diǎn)是厭食、體溫 > 41°c、抑郁和皮膚充血。通常臨床癥狀出現(xiàn)1-4天后死亡。超急性通常發(fā)生在ASF第一次爆發(fā)區(qū)。

急性

疾病的急性形式的特點(diǎn)是厭食, 體溫升高 (40–42°c,104–108°F), 不愿活動, 早期白細(xì)胞減少, 肺水腫,廣泛的淋巴組織壞死和出血,皮膚出血 (尤其是耳朵和兩邊的皮膚)、脾腫大和高死亡率 (Mebus等,1983)。在最后階段,可見急促的呼吸，以及肺水腫引起的鼻腔分泌大量粘液。

圖 25.2 ASF亞臨床感染，由于高度充血造成豬耳朵呈現(xiàn)紫色

有時可能出現(xiàn)鼻部出血, 便秘,嘔吐, 輕度腹瀉。有時出現(xiàn)肛門出血。有時能看到明顯的皮疹，大量充血導(dǎo)致的皮膚發(fā)紫或青紫的斑點(diǎn)，這些斑點(diǎn)在四肢、耳朵、胸部和會陰部為不規(guī)則的紫色 (圖 25.2)?？赡苓€會出現(xiàn)血腫和一些壞死組織，這些癥狀在感染中等致病毒株的豬中較為明顯。懷孕母豬常發(fā)生流產(chǎn)，并且也是疾病爆發(fā)的第一個臨床現(xiàn)象。出現(xiàn)臨床癥狀后7天，死亡率90%到100%不等。這種臨床癥狀主要在以前沒有發(fā)生過ASF的區(qū)域能觀察到。

亞急性

亞急性的臨床癥狀與急性類似，但沒有急性嚴(yán)重。亞急性形式的特點(diǎn)是短暫的血小板減少, 白細(xì)胞減少癥和多處出血性病變(Gómez‐Villamandos等,1997)。其他臨床癥狀包括中度到高度的發(fā)燒、腹水、心包積液、多個器官水腫(膽囊或腎臟)、流產(chǎn)或脾腫大。死亡率從30%到70% 不等, 發(fā)病豬可能3–4周后恢復(fù)。這種臨床癥狀可以地方性流行中觀察到。

在撒丁島, 存活的豬群含有ASFV抗體、間歇性病毒血癥或亞急性癥狀, 沒有臨床癥狀或癥狀不典型(Murd等,2016a)。類似的田間現(xiàn)象也發(fā)生在俄羅斯聯(lián)邦(Murd等,2016b) 和實(shí)驗(yàn)室條件下以東歐分離毒株攻毒豬群(Gallardo等,2016)。

慢性

ASF慢性病例主要發(fā)生在伊比利亞半島 (葡萄牙和西班牙) 和受伊比利亞半島毒株感染的感染國家。最近，接種了東歐分離毒株的感染豬業(yè)發(fā)現(xiàn)了慢性病例 (Gallardo等,2018)。

病理變化

ASFV有很多種組織病變，這取決于毒株的毒力。急性和亞急性以廣泛性的出血和淋巴組織的壞死為病變特征。相反，在一些亞臨床或者慢性病例中病變很輕或不存在病變(Mebus等,1983)。

病變發(fā)生的主要部位包括脾臟、淋巴結(jié)、腎臟和心臟（Sánchez‐Botija,1982）。

脾臟可呈現(xiàn)暗黑色、腫大、梗死和變脆，有時可見被膜下出血的大梗死灶(圖 25.3)。

圖 25.3 急性ASF腫大發(fā)黑的脾臟

圖 25.4 ASF感染豬的腎臟皮質(zhì)部表面有許多出血斑

淋巴結(jié)出血、水腫、易碎，經(jīng)常類似暗紅色血腫。由于充血和背膜下出血，淋巴結(jié)切面呈大理石樣變。腎臟表面 (圖25.4)及切面皮質(zhì)部有斑點(diǎn)狀出血，腎盂也有點(diǎn)狀出血。有些病例可見帶有出血的漿液性心包積液。在心內(nèi)、外膜可見斑狀出血。

急性ASFV還能觀察到一些其他病變，例如腹腔內(nèi)漿液性出血性滲出物，整個消化道黏膜水腫、出血。肝臟和膽囊充血，膀胱黏膜斑點(diǎn)狀出血。胸腔積液及胸膜斑點(diǎn)狀出血，以及常見肺水腫。腦膜、脈絡(luò)膜、腦組織發(fā)生較為嚴(yán)重的充血(Mebus等,1983)。亞急性與急性的病變很類似，但亞急性的病變較輕。亞急性的主要病變特征是腎臟和淋巴結(jié)有較大的出血點(diǎn)。脾臟腫大出血。肺部水腫、出血，個別病例可見間質(zhì)性肺炎。

在急性ASFV病例中，血管和淋巴器官會出現(xiàn)組織病理學(xué)病變。病變特征是出血、血管內(nèi)形成微血栓以及內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，并伴有內(nèi)皮下壞死細(xì)胞的大量聚集(Gómez‐Villamandos等,1995)。脾臟出血性腫大是急性和亞急性具有的主要特征病變，當(dāng)病毒復(fù)制導(dǎo)致由于脾臟巨噬細(xì)胞壞死，破壞脾臟組織結(jié)構(gòu)，從而出現(xiàn)這種脾臟出血性腫大。急性ASF的淋巴組織病變主要見于淋巴器官的T細(xì)胞區(qū)，但仍未觀察到ASFV能在淋巴細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制 (Carrasco等,1996; Mínguez等,1988)。

慢性ASF主要病變特征是呼吸道的變化，但是病變很輕或者不明顯 (Gómez‐Villamandos等,1995;Mebus等,1983)。病變包括纖維素胸膜炎、胸膜黏連、干酪樣肺炎和淋巴網(wǎng)狀組織增生。纖維素性心包炎和壞死性皮膚病變也很常見。

診斷

實(shí)驗(yàn)室檢測是準(zhǔn)確診斷ASF所必需的，因?yàn)锳SF的臨床癥狀和病變與豬的其他一些出血性疾病很相似，比如豬瘟（豬霍亂）、豬丹毒和敗血性沙門氏菌病。不能根據(jù)臨床癥狀和總體病變來診斷是否感染ASF。在ASF疫區(qū)，對康復(fù)豬和只有非典型臨床癥狀的豬進(jìn)行診斷評估非常重要。很多實(shí)驗(yàn)室檢查方法都可以用來診斷ASF。實(shí)驗(yàn)室診斷常檢查的器官包括淋巴結(jié)、腎臟、脾臟、肺、血液和血清。對于野豬，腿骨的骨髓是理想的檢測病料 (Gallardo等,2015)。病變組織可用于病毒的分離或檢測。組織滲出液和血清主要用于抗體檢測，但也可以用于檢測病毒。

ASFV鑒定

檢測和鑒定ASFV的最方便、最安全、最常用的技術(shù)是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) (Agüero等,2003;Fernández‐Pinero等,2013;King等,2003)和血細(xì)胞吸附試驗(yàn)(HAT) (Malmquist 和 Hay,1960)。HAT是ASF的標(biāo)準(zhǔn)參考試驗(yàn)。

多種基于PCR的方法對檢測當(dāng)前流行的ASFV毒株為具有高度的一致性、特異性的和高敏感性。同時也適用于檢測無細(xì)胞吸附和低毒力分離株。引物和探針都是根據(jù)病毒基因組中高度保守區(qū)域VP72設(shè)計(jì)的。也有采用實(shí)時熒光定量PCR(Fernández‐Pinero等,2013)，給慢性感染豬群的檢測提供了高度靈敏的方法。

由于血細(xì)胞吸附試驗(yàn)的特異性和敏感新，HAT檢測范圍非常廣泛，HAT方法應(yīng)該被用來評估疑似疫情，特別是當(dāng)其他測試結(jié)果為陰性時，應(yīng)該用HAT方法確診。血細(xì)胞吸附試驗(yàn)是利用紅細(xì)胞能吸附在體外培養(yǎng)的感染ASFV的巨噬細(xì)胞表面。在ASFV誘導(dǎo)的細(xì)胞病變出現(xiàn)前，紅細(xì)胞能在巨噬細(xì)胞周圍形成典型的玫瑰花環(huán)(Malmquist和Hay,1960)。但是盡管HAT試驗(yàn)是ASFV的最敏感方法，但應(yīng)該指出的是，一些ASFV分離株能誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的病變，而不能出現(xiàn)紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象(Sánchez‐Botija,1982)。這些毒株可利用PCR或者直接免疫熒光方法進(jìn)行確定。

血清學(xué)檢測

已經(jīng)有多種技術(shù)應(yīng)用于檢測抗ASFV抗體。ELISA(Sánchez-vizcaíno,1986;Sánchez‐Vizcaíno等,1979)推薦用于大規(guī)模篩查, 而間接免疫過氧化物酶反應(yīng)檢測,間接免疫熒光和免疫印跡法推薦用于血清學(xué)陰性或可疑樣品的確認(rèn) (Gallardo等,2013,2015; Pastor等,1987)。

保存條件較差的樣品或者血液樣品而非血清樣品（至少對于野豬來說）(Arias等,1993;Gallardo等,2015)可能對ELISA的敏感性有所影響，但是 "內(nèi)部" 的以一種重組蛋白作為包被抗原的ELISA方法不受這方面的限制(Gallardo等,2006,2015)。

只要豬只感染超過1周，間接免疫過氧化物酶法與間接免疫熒光法就與 ELISA一樣，具有高度的診斷靈敏性和特異性 (Arias和Sánchez-vizcaíno,2002)。免疫印跡法檢測抗體確定是否陽性, 這種抗體在感染后2周出現(xiàn), 當(dāng)血清疑似保存不善時候推薦采用此方法(Arias,1993)。

ASF血清學(xué)診斷在疾病檢測中發(fā)揮很大作用，因?yàn)榈侥壳盀橹惯€沒有行之有效的疫苗。當(dāng)出現(xiàn)ASFV抗體時就證明被感染了。這對于從亞急性感染或不明顯的感染中康復(fù)的豬群檢測尤為重要，這些豬只通常產(chǎn)生高水平的ASFV特異性抗體：免疫球蛋白M（IgM）感染后4天能檢測到，IgG感染后6-8天能檢測到。病毒感染后抗體在體內(nèi)大約持續(xù)6個月，有的在病毒感染幾年后仍能檢測到(Aria和Sánchez‐Vizcaíno,2002; Wilkinson,1984)。病毒進(jìn)入體內(nèi)早期就顯現(xiàn)并隨后持續(xù)存在的抗體，使得它們可用于檢測亞急性和無明顯癥狀的病例。

免疫

盡管ASFV疫苗研究取得了重大進(jìn)展，但目前仍沒有商業(yè)化疫苗。感染ASFV后存活下來的豬只能對所感染的相應(yīng)病毒具有抵抗力，某些情況下，對異源毒株有交叉保護(hù) (Boinas等,2004;Burmakina等,2016;King等,2011;Ruiz‐Gonzalvo等,1981)。ASFV 所涉及的免疫保護(hù)機(jī)制了解甚少, 雖然細(xì)胞免疫和體液免疫看起來是需要的 (Takamatsu等,2013)。免疫保護(hù)的主要障礙似乎是產(chǎn)生不了完全中和抗體和病毒分離株的巨大差異。注射感染豬只或其他感染動物的免疫血清，被動體液免疫對ASFV有部分保護(hù)，例如臨床癥狀的延遲或緩解,病毒血癥水平的降低和更高的存活率 (Onisk等,1994;Schlafer等,1984a,b;Wardley等,1985)。

體內(nèi)和體外研究表明抗體在補(bǔ)體-介導(dǎo)細(xì)胞溶解和抗體-依賴細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性過程中有一定作用(Rock,2017;Takamatsu等,2013)。先天性免疫反應(yīng)，例如自然殺傷細(xì)胞活性升高 (Leit?o等,2001)和CD8+ T 淋巴細(xì)胞的特定亞群的細(xì)胞毒性活性也發(fā)揮重要作用(Martins和Leit?o等,1994;Oura等,2005)。

預(yù)防和控制

任何情況下，只要有可疑的ASF感染豬，應(yīng)該限制豬的流動，立即進(jìn)行診斷。要記住，低毒力的ASFV毒株沒有明顯癥狀或病變。

目前還沒有比較有效的措施或者疫苗來對抗ASFV。已經(jīng)為尋找有效的疫苗進(jìn)行了很多嘗試。1963年在葡萄牙開始嘗試第一個弱毒活疫苗，但沒有成功(Manso‐Ribeiro等,1963)。后來，幾種弱毒疫苗被證明有一定效果(King等,2011;Leit?o等2001; O'Donnell等,2016;Reis等,2016)，但在安全性和有效保護(hù)性方面仍存在很多不足。

因?yàn)槿狈σ呙绾虯SFV引起的巨大經(jīng)濟(jì)損失，也因?yàn)檫€沒有控制該病的有效疫苗，所以保護(hù)ASF無疫區(qū)免受病毒的侵入變得非常關(guān)鍵。流行病研究表明，國際機(jī)場和港口中被污染的垃圾是ASFV重要的傳染源(EFSA,2010)。因此，所有飛機(jī)和輪船上剩余的食物都應(yīng)該被焚燒。

在一些發(fā)病溫和和隱形感染的歐洲地區(qū)，比如撒丁島，防控措施主要依靠控制豬和豬產(chǎn)品的流動，結(jié)合廣泛的血清學(xué)調(diào)查來檢測帶毒豬。在ASF流行的非洲南方和東部地區(qū)，最重要的是控制天然宿主，也就是軟蜱 (O.moubata)和非洲野豬疣豬，采取措施阻止它們和家豬接觸。在歐洲東部，有必要認(rèn)識到病毒自然帶毒動物在生物循環(huán)的作用，應(yīng)該控制家豬、野豬以及豬副產(chǎn)品的流動。在豬群中控制和凈化ASF的方法因不同的地區(qū)和大陸、流行病的形勢和情況、經(jīng)濟(jì)資源以及鄰近地區(qū)的形勢特點(diǎn)而不同。在1985-1995年期間，西班牙成立一個范圍廣泛的組織根除ASF，這個組織得到了歐盟的支持 (Arias和Sánchez‐Vizcaíno,2002a;Bech‐Nielsen等,1995)。沒有疫苗也可以通過有效的應(yīng)急措施根除 ASFV。每個國家都應(yīng)該準(zhǔn)備一套可以隨時執(zhí)行的應(yīng)急措施，以防ASF的意外入侵。