本文整理了來自德國因塞爾里姆斯弗里德里希-洛弗勒研究所的一份針對豬ASFV(非洲豬瘟)帶毒狀態(tài)的研究報告,實驗共用了36頭豬,歷時165天,得到了一個明確的結(jié)果:陰性哨兵豬與實驗感染豬在感染后99天混欄沒有轉(zhuǎn)陽,實驗感染存活的豬組織中也沒有分離到病毒,表明存活下來的感染豬并不會長期帶毒,而是隨著時間的推移,病毒載量逐漸降低,并最后完全清除病毒。這一結(jié)果也與之前的幾項研究結(jié)果一致。
隨著近期豬價上漲,很多養(yǎng)豬人都在考慮復產(chǎn)的問題。一線的養(yǎng)豬人也有聽說過耐受住非洲豬瘟病毒感染,最后存活下來并康復的案例。
不過大家心中一直會有顧慮:
1、非洲豬瘟在豬體內(nèi)究竟會帶毒多久呢?
2、如果感染的豬康復后,體內(nèi)還會帶毒嗎?
3、康復的母豬,會不會傳染給健康的未感染的仔豬呢?
4、如果感染過非洲豬瘟的豬場,多久才能考慮復產(chǎn)?
上面這張圖表是伊比利亞及西半球的歐洲家豬中觀察到手血液中病毒和抗體隨著時間的變化及與ASFV感染不同階段的關系。對那些幸存者而言何時體內(nèi)才會檢測不出病毒我們也不得而知,德國因塞爾里姆斯弗里德里希-洛弗勒研究所開展了這方面的研究工作,給我們以明確的答案。
這項研究采用實驗使用被認為是I型的中等毒力的ASFV分離株(荷蘭86株)作為模型病毒,用36頭豬,30頭豬為實驗感染豬(C豬),6頭豬為陰性哨兵豬(S豬)。本實驗在C豬感染后的第164/165天結(jié)束。最后得到了一個明確的結(jié)論:實驗感染豬在感染后99天后,陰性哨兵豬與其混欄沒有轉(zhuǎn)陽,實驗感染存活的豬組織中也沒有分離到病毒,表明存活下來的感染豬并不會長期帶毒,而是隨著時間的推移,病毒載量逐漸降低,并最后完全清除病毒。
總體來說,實驗中沒有看到任何感染中等毒力的ASFV后仍然存活的豬存在帶毒狀態(tài)。血液中病毒基因組的長期可檢測性不僅是一個風險,也是一個診斷的機會。在感染ASFV后至少90天內(nèi),仍然能夠在受感染的豬身上用PCR檢測出病毒。
現(xiàn)將該研究要點摘錄如下:
一、30頭5~6月齡健康雜交家豬,用2ml含有2X104HAU的荷蘭86株ASFV的細胞培養(yǎng)上清液用滴鼻的方式進行感染。在感染后的32天內(nèi),有10頭豬因ASFV死亡,1頭因中樞神經(jīng)紊亂進行安樂死(28天時),有19頭存活。死亡率為36.67%。
二、存活的19頭豬中,有9頭在感染91天內(nèi),ASFV特異性qPCR呈陰性,其余10頭在91天后, ASFV特異性qPCR才呈陰性。
三、所有接種的豬都出現(xiàn)了包括發(fā)燒在內(nèi)的臨床癥狀。大多數(shù)的豬,在接種后4-6天就首次出現(xiàn)臨床評分和體溫升高,最晚的是接種后24天。急性期平均每頭豬持續(xù)8-10天(4-19天不等),臨床評分最大值為7-14分。
四、在試驗過程中,在所有30頭感染豬的血液樣本中均發(fā)現(xiàn)了非洲豬瘟病毒基因組和活病毒。首批陽性結(jié)果在3-21天檢測到。從第3天開始,qPCR陽性豬的數(shù)量穩(wěn)步增加,直到29天時所有豬都出現(xiàn)陽性結(jié)果。與伊比利亞半島的資料比較吻合。
五、在第10天和14天時檢測到最高的基因組載量,最大Cq值為18-19。在第29天,Cq值下降了6,在接種ASFV的第42天時,6頭豬首次出現(xiàn)qPCR陰性結(jié)果,48天達到7頭,63天達到10頭。91天后,52%的C豬qPCR結(jié)果仍為陽性,且基因組載量下降(cq值28-30)。
六、血吸附試驗在血清中首次檢測到ASFV與全血的qPCR結(jié)果一致。隨后,血吸附試驗陽性樣本量迅速下降,直到從第63天開始所有存活的豬呈陰性。從血液中清除需要>90天(盡管從第63天開始就檢測不到活病毒了),因此,我們可以說病毒存留時間很長。鑒于ASFV被認為是安全地被包裹在紅細胞膜中(Bastoset al., 2003; Gallardo et al., 2009),這些結(jié)果可能與豬紅細胞的最大壽命是約65~85天有關(Liebich, 2003)。
七、在每只實驗感染的豬的各種拭子樣本中(包括:糞拭子、口咽淺表拭子、口咽拭子),均觀察到了不同程度的散毒情況??谘蕵颖镜年栃越Y(jié)果更多,基因組載量更高(最大Cq值28),并且在接種后第63天都還能監(jiān)測到陽性結(jié)果。到91天后所有樣本沒有檢測到陽性,可以推測,91天后,才沒有散毒。
八、試驗期間,有3頭C豬和1頭S豬因為非相關的原因被安樂死(接種28天時有1頭C豬,接種86天時有1頭C豬,128天時有1頭C豬,135天時有1頭S豬)。
九、在感染后的第99天,將存活的19頭C豬重新混群,并將6頭健康的S豬混入其中(每組2頭),這6頭S豬在暴露于C豬前也沒有ASFV和相關抗體。在暴露開始后的28天內(nèi),用血吸附試驗和常規(guī)PCR 對這些豬進行了四次臨床評估和采樣,分別為感染后的第105、112、119和126 天。隨后,實驗措施集中在臨床觀察和必要時的病理形態(tài)學研究。直到試驗結(jié)束時,即人工感染后第164天,所有健康的s豬和所有存活的C豬,均未檢測出非洲豬瘟病毒。其中包括1頭S豬的11個胎兒脾臟樣本。
十、可以得出結(jié)論,在感染第99天后,幸存的豬能完全控制和消滅ASFV病毒,并且不會再散毒。
十一、但是如果有蜱蟲出現(xiàn)的話,情況就有可能不同,這個試驗討論的不是通過肌肉注射/靜脈注射感染易感動物,所以,提醒我們,如果要想成功復養(yǎng),還必須消滅蜱蟲。
十二、在生物安全風險評估方面,必須考慮到最壞的情況。如果野豬或者家豬死于其他原因,那么尸體就可能成為易感動物的一個感染源。在這種情況下,我們必須考慮經(jīng)口感染而不是非腸道途徑。
十三、由于試驗中最晚出現(xiàn)臨床癥狀的豬是在感染后24天,所以現(xiàn)實中最為穩(wěn)妥的做法可能是在觀察到臨床癥狀后的第115天,即4個月后,豬場再考慮復養(yǎng)計劃,可能更為穩(wěn)妥。
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