遇秀玲博士

遇秀玲：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)病理學(xué)博士，曾任軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心副研究員，中國動物疫病預(yù)防控制中心病理室主任，長期從事實驗動物病理檢測研究工作。

問題一：為什么藍(lán)耳病在許多豬場會出現(xiàn)免疫或不免疫，都會發(fā)病很嚴(yán)重帶來很大損失？

答：我想不僅僅是藍(lán)耳病，我國豬病都有一個共性問題，就是診斷的問題。很多豬場發(fā)病在臨床現(xiàn)場一看就診斷，或?qū)嶒炇乙粰z出藍(lán)耳病毒就診斷為藍(lán)耳病了。這里要強(qiáng)調(diào)的是：藍(lán)耳病毒的檢出 ≠ 藍(lán)耳病的存在。

疾病是一個因病原造成臨床影響的過程，而病原可以是潛伏在體內(nèi)，呈持續(xù)帶毒狀態(tài)，不見得一定有臨床問題。另一方面，藍(lán)耳病現(xiàn)在大部分使用減毒活疫苗免疫防控，疫苗毒在一定的時間內(nèi)也是可檢出的，所以檢出的病毒如果不做基因測序等鑒別檢驗，很可能會造成臨床上的誤診。

問題二：臨床上很多豬群檢出藍(lán)耳病毒，那么如何判斷這個豬場因為藍(lán)耳病毒的存在造成了疫情呢？

答：第一，在最近沒有藍(lán)耳免疫的情況下，建議使用雙份血清的評價方式。 即豬場一直在持續(xù)監(jiān)測的狀態(tài)下，當(dāng)感到臨床不穩(wěn)定時采血檢測，要和原來監(jiān)測時的檢測結(jié)果對比。如果不穩(wěn)定時血清PRRSV抗體值突然升高，一下子有了較大的變化，可以考慮是藍(lán)耳病毒帶來的影響。

第二，在豬場疫情的早期，對早期有代表性的發(fā)病豬及時剖檢、采樣送實驗室進(jìn)行檢測診斷。

如果不是在疫情早期進(jìn)行采樣，或者已經(jīng)采用了各種方法治療一段時間后再去做檢測，可能得出的診斷結(jié)論就會是多種病原混合感染，而不是這次疫情的病原?，F(xiàn)實中多數(shù)情況是，這個發(fā)病群等到檢測結(jié)果出來了再去采取措施控制已經(jīng)來不及了。其實可以在發(fā)病初期采樣檢測，同時根據(jù)臨床判斷采取控制措施。這樣等診斷結(jié)果出來了，就算之前的判斷錯誤，也可以證實本次發(fā)病的原因是什么，對今后的疫情防控有指導(dǎo)意義的。

問題三：藍(lán)耳病檢測采樣的靶組織和靶器官應(yīng)該是哪些呢？

答：對藍(lán)耳病來說，血液樣是很好的樣品，另外我們應(yīng)該對發(fā)病過程中臨床上有代表性的豬只進(jìn)行剖檢，采取病毒檢出率高的靶器官組織（藍(lán)耳病毒除了血液、扁桃體和肺是最重要的靶器官外，在肺門淋巴結(jié)和下頜淋巴結(jié)也可以檢出）。

作為藍(lán)耳病毒，其最重要的靶組織就是 扁桃體和肺臟，血液作為最容易采集的樣品，在藍(lán)耳病的檢出中意義也是非常大的。血液中病毒檢出時間較早，一般感染后3天左右就能從血液中檢出，同時持續(xù)時間也非常長，可以達(dá)到2-3個月，所以作為活體檢測，血液是最好的。作為死亡剖檢動物來說，扁桃體和肺臟是最重要的靶器官。

問題四：關(guān)于藍(lán)耳病如何做鑒別診斷，保育豬耳朵發(fā)藍(lán)就一定是藍(lán)耳病嗎？在實驗室檢測上如何區(qū)分高藍(lán)和經(jīng)典毒株？

答：首先糾正一下，并不是豬只耳朵發(fā)藍(lán)一定是藍(lán)耳病，末梢循環(huán)障礙時豬只耳朵都會發(fā)藍(lán)。

藍(lán)耳病有一個典型的癥狀，就是眼結(jié)膜炎，開始可能是漿液性的，后面可能會發(fā)展成粘液性的。高致病性藍(lán)耳病20-40%的豬有神經(jīng)癥狀，因為藍(lán)耳病毒在后期會進(jìn)入到腦組織中，造成一些神經(jīng)癥狀，可以看到運(yùn)動障礙、抽搐、后軀麻痹等。扁桃體出血、潰瘍，肺組織實變。在敗血癥時可看到脾臟腫大淤血、梗死灶，但是這種腫大與豬瘟、非洲豬瘟以及一些細(xì)菌性疾病時我們看到的脾臟腫大是有區(qū)別的，除非后續(xù)繼發(fā)細(xì)菌感染，單一PRRS病毒造成的損傷是不太容易看到那種脾臟極度腫大的。

臨床上近年來在PRRSV鑒別檢驗這塊要做的工作很多。我們檢測藍(lán)耳病毒所用的PCR方法可能是各種各樣的，有些可能直奔高致病藍(lán)耳病毒的檢測去了，有些可能檢測的是經(jīng)典藍(lán)耳。事實上，在所有的病原檢測方法里，沒有所謂針對經(jīng)典藍(lán)耳病毒的，只有藍(lán)耳病毒通用的RT-PCR。因為藍(lán)耳病毒通用檢測方法是針對藍(lán)耳病毒最保守的片段設(shè)計的引物，而引物不同靈敏度也不同，作為藍(lán)耳病毒的檢測方法來說，使用最保守片段引物是最靈敏的，我們用的通檢RT-PCR就是這樣的方法。

比如使用通檢的RT-PCR方法檢出十個樣品里面有八個陽性，而用檢變異株RT-PCR方法（引物），十個里面檢出六個原來陽性較強(qiáng)的樣品。不是說漏掉的那兩個弱陽性就是經(jīng)典株，是因為兩種方法的靈敏度不同造成那兩個弱陽性樣本就沒有被檢出，假如送去測序它們有可能都是變異株。所以說使用通檢RT-PCR方法只能告訴你檢出來是藍(lán)耳病毒陽性，而不能確定是哪個毒株。而接下來再用檢變異株的RT-PCR方法檢顯示一部分陽性一部分陰性，是因為后一種方法靈敏度比通檢的方法低，原來強(qiáng)陽性的現(xiàn)在檢出是陽性，弱陽性的檢出就是陰性了，而不能說那一部分變?yōu)殛幮缘木褪墙?jīng)典株。

有些場檢出藍(lán)耳病既有高致病的也有經(jīng)典的，有可能是因為檢測方法靈敏度不同造成的對檢測結(jié)果的理解誤區(qū)。在通檢陽性的結(jié)果下，需要再做鑒別檢驗才能告訴你這個毒株是什么類型。

問題五：與藍(lán)耳病臨床癥狀相似的疾病如何做鑒別診斷？

答：對臨床癥狀相似或相同的病做鑒別診斷，這點非常重要。有些場在臨床診斷上，把其他疾病引發(fā)的癥狀歸結(jié)到藍(lán)耳病上。比如2012年，在偽狂犬流行毒株造成的豬偽狂犬爆發(fā)場，發(fā)病豬肉眼看到與高致病性藍(lán)耳病相似的肺實變，但是做成組織切片就發(fā)現(xiàn)，情況大相徑庭。病豬肺臟在組織學(xué)上看到的是壞死灶，這是偽狂犬的典型病變，因為偽狂犬病就是以灶性壞死為組織學(xué)特點。但是藍(lán)耳病毒主要在肺泡2型細(xì)胞和巨噬細(xì)胞增殖，肺組織除了間質(zhì)性肺炎并沒有其他變化。之后在肺免疫組化染色中檢出的是偽狂犬病毒而沒有藍(lán)耳病毒。這些臨床表現(xiàn)相似的疾病在病理組織學(xué)中是可以清晰的做區(qū)分的。

問題六：現(xiàn)在在藍(lán)耳病毒的檢測中還需要區(qū)別野毒和疫苗毒，那么豬場如何去區(qū)分是野毒感染還是疫苗毒，以及如何評價打苗以后的結(jié)果？怎么去做檢測？

那么在臨床下什么情況下該選什么蛋白包被的試劑盒呢？N蛋白激發(fā)抗體產(chǎn)生時間很早，如果是一個沒有感染過藍(lán)耳病的地區(qū)或場，一定是用N蛋白來做防控預(yù)警。還有就是做雙份抗體的檢測，豬場一旦出現(xiàn)N蛋白抗體在沒有免疫的情況下出現(xiàn)一個跳升，一定和藍(lán)耳病毒感染發(fā)病相關(guān)性很大。

包被不同蛋白試劑盒之間的區(qū)別

而作為疫苗的免疫效果檢測的，則與糖蛋白相關(guān)性大，N蛋白產(chǎn)生的抗體只代表是不是有感染，與中和抗體及攻毒保護(hù)結(jié)果其實相關(guān)性不大。N蛋白抗體出現(xiàn)較早，持續(xù)時間相對短，且與免疫保護(hù)相關(guān)性較小。糖蛋白抗體產(chǎn)生時間晚，且持續(xù)時間長，與免疫保護(hù)相關(guān)性更好，所以通常用它來做免疫后抗體水平監(jiān)測，監(jiān)測豬群是否處于保護(hù)狀態(tài)。

PRRSV主要蛋白的作用

注：使用上述不同蛋白作為包被抗原的ELISA試劑盒，在臨床上可用于不同免疫和感染背景的豬群。