非洲豬瘟的準(zhǔn)確、快速診斷對于防止 ASF 蔓延、快速撲滅和根除尤其重要。ASFV 自然感染的潛伏期大約為 4—19天 (Wardley et al., 1983)，感染后 7-10 天血液中可檢測到抗體。一個地區(qū)或豬場首次暴發(fā) ASF 時呈最急性、急性感染臨床癥狀，感染豬只表現(xiàn)為急性出血、死亡，由于首次暴發(fā)時發(fā)病豬只在抗體出現(xiàn)前就已經(jīng)死亡，此時首選抗原檢測方法。隨著病毒循環(huán)和擴散，其毒力會下降，感染豬只表現(xiàn)為亞急性和慢性感染臨床癥狀 ，此時抗體檢測更適用于疫情的監(jiān)測和 ASF 根除計劃。

當(dāng)前想復(fù)養(yǎng)的豬場比比皆是，但對于如何才能確保復(fù)養(yǎng)的高成功率，心里面可能都沒有底，加上耳聞目睹的案例是成功的少失敗的多，更讓一些豬場不知所措。其實，發(fā)生了非瘟的豬場復(fù)養(yǎng)真的那么難嗎？這其中又是哪些環(huán)節(jié)是真正制約我們的因素？總結(jié)國內(nèi)成功復(fù)養(yǎng)場的經(jīng)驗，我認(rèn)為在復(fù)養(yǎng)洗消過程中科學(xué)而經(jīng)濟的檢測手段必不可少。

一、非瘟病毒在各種環(huán)境下的適應(yīng)力與豬場改造方案緊密關(guān)聯(lián)

表1：《非洲豬瘟的科學(xué)觀點》

表2：不同環(huán)境中的存活能力

表3：非瘟病毒的熱耐受能力（多方數(shù)據(jù)來源）

由表1可以知道以下幾個重要參數(shù)，非瘟病毒在豬場糞便中僅能存活11天，在被污染的豬圈中至多能存活一個月，但在腐爛的血液中可以存活15周左右的時間，因此在整個洗消過程中清除血跡十分重要，地板縫隙、金屬欄桿、墻面、飼槽要做到先浸泡再打上泡沫發(fā)泡劑，然后使用高壓熱水（45度左右）強力沖洗，去除環(huán)境中的血跡應(yīng)該不在話下，之后再以2~3%的火堿噴灑殺滅非瘟病毒；豬場金屬欄桿上如果污垢較多，可以用鋼絲刷進(jìn)行強力清洗或者重新上油漆。

復(fù)產(chǎn)清掃過程中工程量大的其實是豬舍周邊被污染的土壤、木質(zhì)墊板上的血跡，筆者建議發(fā)過非瘟的豬場豬舍之間的道路最好使用C30混凝土進(jìn)行硬化，豬舍與豬舍間的空地先鏟去表層3cm土壤，然后覆蓋上生石灰（晴天注意適當(dāng)澆水），包括死豬深埋處及氧化塘周邊也要清除表層部分土壤，再覆蓋上生石灰，確保安全。這些鏟走的土壤必須混合上生石灰找地方挖坑深埋處理。

而對于那些可能被污染的木質(zhì)材料、飼料袋、外包裝盒等，能焚燒的則全部焚燒，豬舍今后內(nèi)部不使用木質(zhì)材料，全部換上鋼絲繩綁定電器開關(guān)、插座。妊娠限位欄如果是通貫飼槽，建議敲碎重新做成瓷磚通貫水槽或干脆換上單個不銹鋼飼槽。

復(fù)養(yǎng)是一個系統(tǒng)工程，豬場應(yīng)該抓住全面清群之后5-8個月時間作適當(dāng)?shù)母脑?，新建種豬隔離舍、過渡生活區(qū)（人員至少能在其中生活兩天），重新規(guī)劃全場人員行走路線，嚴(yán)格做到凈道、污道分開、如上圖所示，場內(nèi)設(shè)有專門的進(jìn)豬通道、專門的出豬通道、專門的死豬處理通道，并在全場地圖上標(biāo)示出來，不能凈道、污道混合共用一條道路，那樣可能形成交叉感染。每個崗位、每個人的行走路線都要事先規(guī)劃，嚴(yán)格遵循由凈區(qū)向污區(qū)單向流動原則，人員之間盡量避免交叉污染的可能。新增一些必要的設(shè)施和設(shè)備，如中轉(zhuǎn)料塔、中轉(zhuǎn)對接平臺、中央高壓清洗系統(tǒng)（含熱水）、PCR檢測設(shè)備及試劑、員工衣柜、鞋柜、洗手池、洗澡間等，要讓員工感覺場內(nèi)洗澡就象是在外面洗浴中心淋浴一樣舒心，購買“飄柔”等名牌洗頭膏，使用專門的沐浴露，同時注意浴室防滑設(shè)計，甚至可以增加桑拿間，這樣員工就不會逃避沐浴，沐浴時間遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過十分鐘，有條件的豬場在淋浴處還配備專門的衛(wèi)生間，員工換洗下來的衣服馬上就可以放進(jìn)洗衣機（帶烘干功能更好）浸泡洗干凈，每位員工擦干身體有專門的大浴巾。一個豬場的生物安全水平高低，通過他的洗澡間設(shè)施及員工滿意度調(diào)查基本可知。

二、洗消過程中如何靈活應(yīng)用各種檢測手段？

目前非瘟檢測常用的是qPCR方法，qPCR檢測最大的缺陷就是檢測樣本量大時容易造成實驗室內(nèi)的污染，且采樣后要送相關(guān)實驗室等待結(jié)果，因此一個實驗室每天的檢測樣數(shù)量有著嚴(yán)格的規(guī)定，且qPCR檢測一個樣品的成本基本在20元以上，1000個樣那就是20000元，某種程度上成本還是較高的?，F(xiàn)場檢測究竟有沒有更為經(jīng)濟有效的方法呢？

其實是有的。發(fā)生非瘟復(fù)養(yǎng)場可以在第一遍粗洗、第二遍細(xì)洗中科學(xué)運用手持ATP檢測儀進(jìn)行檢測，因為是手持檢測儀器在現(xiàn)場操作更加方便，十幾秒鐘即能知道哪里洗消存在著死角，從邏輯上講，如果豬場洗消后設(shè)施上還有蛋白和細(xì)菌存在，就不要談ASF病毒能否清除干凈；只有在第三遍精洗及消毒后隔半個小時以上才使用qPCR全面檢測，這樣能有效的節(jié)省檢測費用，同時也達(dá)到洗消檢測的目的。下面重點介紹一下ATP熒光檢測。

ATP(Adenosine Triphosphate)，中文名為腺嘌呤核苷三磷酸，又叫三磷酸腺苷。它普遍存在于細(xì)菌等微生物細(xì)胞內(nèi)，ATP是微生物新陳代謝的能量物質(zhì)。ATP生物發(fā)光法是利用ATP試劑中若干組分如熒光素‐熒光素酶等與被測樣本反應(yīng)產(chǎn)生光子，再利用專門研制的熒光檢測儀來捕捉和檢測發(fā)光值，由于被測樣本所含細(xì)菌等微生物的數(shù)量與所含的ATP值、以及ATP值與發(fā)光值之間存在一定的函數(shù)關(guān)系，因此通過檢測發(fā)光值即能得到被測標(biāo)本所含細(xì)菌等微生物含量。

ATP檢測技術(shù)實驗結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得信賴。美國多個專業(yè)權(quán)威機構(gòu)研究了1000個以上的樣品，這種只需十幾秒就能完成檢測的快速檢測法所得到的實驗結(jié)果90%以上與24‐48小時標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌培養(yǎng)法/平皿法所得結(jié)果一致。測試飲用水時，比標(biāo)準(zhǔn)法靈敏度大100倍以上，而樣品量只要傳統(tǒng)方法的1/100。測定結(jié)果與傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法所得結(jié)果相比，相關(guān)性高達(dá)92‐98%。加拿大食品監(jiān)查協(xié)會經(jīng)過比對實驗后發(fā)現(xiàn)，本產(chǎn)品測定結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法的相關(guān)性是98%。美國FDA推薦使用ATP檢測系統(tǒng)和試劑盒用于牛奶細(xì)菌數(shù)的快速檢測。

2010年，國內(nèi)手持式ATP熒光檢測儀和現(xiàn)場快速檢測ATP試劑一體化拭子進(jìn)入批量生產(chǎn)，性能完全能滿足食品藥品監(jiān)督部門、衛(wèi)生監(jiān)督部門、食品加工行業(yè)、餐飲服務(wù)行業(yè)、航空配餐、大型企業(yè)食堂、學(xué)校食堂、大型活動保障部門等食品安全涉及環(huán)境物體表面檢測、手衛(wèi)生檢測、餐飲具表面潔凈度檢測；化妝品制造業(yè)污染控制、醫(yī)院感染控制、空氣細(xì)菌污染檢測、環(huán)境監(jiān)管部門等污染監(jiān)管領(lǐng)域細(xì)菌檢測和表面潔凈度檢測。我想檢測豬場衛(wèi)生應(yīng)該更不在話下。

ATP熒光檢測法能在十幾秒內(nèi)實現(xiàn)檢測，大大提升了傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)法24‐48小時的工作效率，ATP方法的實現(xiàn)包括儀器、試劑和如何使用三大要素。

儀器為了滿足現(xiàn)場快速檢測的需求，ATP熒光檢測儀宜選擇手持式從而實現(xiàn)流動狀態(tài)即時檢測，當(dāng)儀器和試劑配合使用，整體靈敏度達(dá)到10-15～10-18mol/L范圍時，可以用于食品表明微生物檢測、手衛(wèi)生檢測、餐飲器具潔凈度檢測。

試劑專用的ATP試劑盒，必須是可去除游離ATP和體細(xì)胞ATP，只針對細(xì)菌細(xì)胞ATP檢測，所謂去除干擾物，這是基本要求。其次熒光素酶、蟲螢光素、裂解液、取樣拭子等組分最好設(shè)計成一體化，整體便于現(xiàn)場攜帶方便檢測使用。

如何使用 取樣是影響準(zhǔn)確性和一致性的關(guān)鍵之一，可按照醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范要求，參照手持式ATP儀說明書采樣、檢測、計算得出結(jié)果并記錄報告。運輸車輛及環(huán)境清洗參考值設(shè)定為80RUL。下面介紹一下ATP熒光儀使用方法。

手持式ATP檢測儀，操作十分方便

ATP熒光檢測 的優(yōu)勢所在

l靈敏度高—— 10-15～10-18mol/L；

l速度快——常規(guī)培養(yǎng)法至少18-24h以上，而ATP只需要幾分鐘；

l可行性——微生物數(shù)量與微生物體內(nèi)所含ATP有著明確的相關(guān)性。通過檢測ATP含量，可間接得出反應(yīng)中微生物數(shù)量；

l可操作性——傳統(tǒng)細(xì)菌培養(yǎng)方法需在實驗室由經(jīng)過培訓(xùn)的技術(shù)人員進(jìn)行操作；而ATP快速潔凈度檢測操作非常簡便，只需簡單的培訓(xùn)即可由一般工作人員進(jìn)行現(xiàn)場操作；

l性價比更高—— ATP生物熒光檢測與實驗室熒光PCR比，費用大大降低。

總之，科學(xué)而實用的ATP熒光檢測能節(jié)省時間和檢測的工作量，同時也能節(jié)省檢測費用，希望想復(fù)養(yǎng)的豬場能把這個檢測方法能靈活應(yīng)用于豬場復(fù)養(yǎng)洗消過程中，從而減少qPCR的采樣數(shù)，減輕實驗室的工作量，減少實驗誤操作的可能性。