2020年我國家豬自然發(fā)生的低毒力非洲豬瘟病毒的出現(xiàn)和流行

孫恩成1，張振江1，王子龍2，何喜軍2，張先鋒2王露露2，王文清1，黃連玉1，西飛1，皇甫皓月1，謝蓋1，霍紅1，孫建紅1田志軍1，夏薇1，于學(xué)武3，李芳 2，劉仁強2，關(guān)云濤1趙東明4 和布志高5

 引文：科學(xué)中國生命科學(xué)DOI：10.1007/s11427-021-1904-4

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2月 23日，中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所步志高團隊在 SCIENCE CHINA Life Sciences上發(fā)表了的最新文章 Emergence and prevalence of naturally occurring lower virulent African swine fever viruses in domestic pigs in China in 2020 。

2020年 6月 ~12月間，該團隊對中國 7個省份（黑龍江、吉林、遼寧、山西、內(nèi)蒙古、河北、湖北）進(jìn)行了非洲豬瘟病毒監(jiān)測，從 3660個樣本中分離并鑒定出 22種變異株，其中， 11株病毒在 EP402R基因（編碼 CD2v蛋白）上有不同形式的變異或缺失，并且表現(xiàn)非紅細(xì)胞吸附（ non-HAD）。對其中 4個變異株的毒力測試結(jié)果表明，其中兩株非紅細(xì)胞吸附（ non-HAD）病毒的毒力更低，但具有高度傳播性。高劑量感染時導(dǎo)致部分死亡并引起急性或亞急性疾病，而低劑量感染導(dǎo)致非致死、亞急性或慢性疾病和持續(xù)感染。

低毒力的天然突變體的出現(xiàn)給ASF的早期診斷帶來了更大的困難，也為 ASFV的控制帶來了新的挑戰(zhàn)。

非洲豬瘟病毒(ASFV)在中國已經(jīng)傳播了兩年多，目前尚不清楚病毒的生物學(xué)特性是否發(fā)生了變化。在這里， 我們報告了從20年6月到20年12月在中國七個省對ASFV的監(jiān)測情況 。共分離出22種病毒，主要表現(xiàn)為基因型II 發(fā)生突變、缺失、插入或短片段替換。所有分離株與中國最早的分離株HLJ/2018(HLJ/18)相比，11個分離株在EP402R基因 （編碼CD2v蛋白）中有四種不同類型的自然突變或缺失 顯示非吸血(非HAD)表型。對其中4個分離株進(jìn)行了檢測豬的毒力；兩種被發(fā)現(xiàn)與HLJ/18一樣具有高度致死性。不過，有兩個非HAD分離株毒力較低，但高度可傳播；感染10的6次方TCID50 劑量部分致死，引起急性或亞急性疾病，而10的3次方TCID50 劑量引起非致命性、亞急性或慢性疾病和持續(xù)感染。低毒天然突變體的出現(xiàn)給非瘟早期診斷帶來了更大的困難，為非瘟ASFV控制帶來了新的挑戰(zhàn)。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟病毒，天然突變體，非吸附型，低毒力

表1 2020年中國分離鑒定出的22種毒株

圖1.2020年在中國分離的22種非洲豬瘟病毒(ASFVs)的核苷酸插入、缺失、突變和替換。

圖2.MGF 110-1L基因的遺傳分析

圖3.體外篩選asfv的特性

表2 接種不同劑量2020asfv變異株的豬的臨床表現(xiàn)

圖4.豬場ASFV分離株的致死率。

為測定非洲豬瘟病毒在豬體內(nèi)的毒力，用HuB/628/20和HLJ/44/20接種4頭SPF豬。

使用 HLJ/HRB1/20（非紅細(xì)胞吸附病毒）進(jìn)行攻毒實驗，高劑量感染4頭豬中：2頭在接種后的10天開始發(fā)燒，接種后15天發(fā)展出包括關(guān)節(jié)炎、氣腫、皮膚壞死和沉郁等疾病癥狀，分別在接種后16天和24天死亡；1頭豬在第13天發(fā)燒，第18天表現(xiàn)疾病癥狀，第23天死亡；一頭豬第22天發(fā)燒，在28天的觀察期中保持存活。

低劑量感染時，4頭豬中：1頭豬17天開始發(fā)燒，18天表現(xiàn)癥狀；一頭豬僅在9-12天之間發(fā)燒。所有4頭豬都在28天觀察期中保持存活。

使用qPCR對實驗豬樣品進(jìn)行DNA檢測時，可檢出時間為，高劑量感染的豬中：口腔拭子在第4-6天，直腸拭子第10天，血液第3-5天；低劑量感染的豬種，口腔拭子8-10天，直腸拭子10-12天，血液5-7天。

為驗證非紅細(xì)胞吸附病毒的傳播性，在高劑量感染組中同時放入了另外兩頭豬，兩頭豬分別在接觸后的第6和12天在口腔拭子中可以檢出病毒DNA。兩頭接觸豬在28天觀察期內(nèi)沒有表現(xiàn)明顯癥狀。

具體詳情請看以下圖表：

圖5. HLJ/HRB1/20感染豬的臨床特征和病變

圖6.從 HLJ/HRB1/20感染豬和接觸豬身上采集的口腔、直腸拭子和血液樣本中的病毒DNA拷貝數(shù)

圖7.從 HLJ/HRB1/20感染豬和接觸豬身上采集的器官樣本中的病毒DNA拷貝數(shù)

表 3 接種不同劑量的非紅細(xì)胞吸附 HLJ/HRB1/20病毒后豬的組織病變情況

從表3看，低劑量感染豬只28天內(nèi)均能存活，臨床癥狀幾乎接近無，剖檢僅表現(xiàn)出心包有20-100ml積液，清亮或渾濁，淋巴結(jié)充血腫脹，肺肉質(zhì)變或萎縮，脾臟、扁桃體均無變化。 低毒力的天然突變體的出現(xiàn)確實給ASF的早期診斷帶來了更大的困難，也為ASFV的控制帶來了新的挑戰(zhàn)。