對于病死豬檢測ASFV樣本,OIE推薦的是脾臟、淋巴結(jié)、肺臟、扁桃體和腎臟,然而獲取這些樣本需要對病死豬進(jìn)行解剖,不僅費(fèi)事,而且容易污染環(huán)境,因此本文評估了腹股溝淋巴結(jié)作為檢測樣本的準(zhǔn)確性,如此做,采樣工作將在幾分鐘內(nèi)完成,同時(shí)不會(huì)對環(huán)境造成污染。
評估結(jié)果表明,ASFV在腹股溝淋巴結(jié)與脾臟中的的病毒載量相近,同時(shí)對于感染ASFV強(qiáng)毒和中等毒力豬的具有極高的準(zhǔn)確性和敏感性(100%)。因此,用腹股溝淋巴結(jié)檢測ASFV是可行的,適用于商品場、母豬場以及屠宰場,或當(dāng)豬場不明原因的出現(xiàn)大規(guī)模死亡時(shí)進(jìn)行監(jiān)測。
腹股溝淋巴結(jié)的采樣方法如下:
實(shí)驗(yàn)過程
取4-5周齡的三元雜交豬,分別進(jìn)行試驗(yàn)。
一、試驗(yàn)1的3頭豬通過口鼻感染ASFv愛沙尼亞2014株,2ml病毒液每個(gè)鼻孔0.5ml,口服1ml,攻毒劑量為2×105 TCID50,攻毒后6天,試驗(yàn)組開始表現(xiàn)為高熱和精神沉郁。
二、試驗(yàn)2的4-18號豬,通過口鼻感染ASFv愛沙尼亞2014株,攻毒劑量為2×105 TCID50,試驗(yàn)豬在攻毒后4天出現(xiàn)發(fā)熱及精神沉郁等癥狀。在攻毒后7天,18號豬死亡。
三、試驗(yàn)3的19-20號豬,肌肉注射ASFV加納20株(2017年基因1型),每頭豬在后腿注射2ml,每條腿注射1ml,攻毒劑量為1×103TCID50。攻毒5天后,19-20號豬均出現(xiàn)高熱,昏昏欲睡,病情發(fā)展快速,有便血出現(xiàn)。攻毒后7天對兩頭豬安樂死。
四、試驗(yàn)4的21-22號豬,口鼻攻毒ASFv尼日利亞 RV502株3ml,這是2020年從尼日利亞分離到的基因2型非瘟強(qiáng)毒株。每頭豬攻毒2×105 TCID50,兩頭豬均在攻毒后4天出現(xiàn)高熱,糞便顆粒干燥、發(fā)黑,精神沉郁,攻毒后5天兩頭豬均出現(xiàn)直腸出血,21號在攻毒后6天死亡,22號也在同一天執(zhí)行安樂死。
五、試驗(yàn)5的23-25號豬,口鼻感染越南ASFV 2561株2.8ml,每頭豬攻毒2×105 TCID50。
六、試驗(yàn)6的26-44號豬,肌肉注射ASFV格魯吉亞2007株1ml,攻毒劑量為1×103TCID50。用于評估口腔液樣本。
1、脾臟和腹股溝淋巴結(jié)中的ASFV病毒載量,發(fā)現(xiàn)所有ASFV毒株之間均成正相關(guān)。
2、中等毒力和強(qiáng)毒株的相關(guān)性,脾臟樣本和腹股溝淋巴結(jié)的病毒載量仍然呈正相關(guān),且差異極顯著。
3、感染中等毒力的ASFV愛沙尼亞2014豬的樣本,脾臟和腹股溝淋巴結(jié)的正相關(guān)程度最高。
將脾臟和腹股溝淋巴結(jié)ASFV平均病毒載量進(jìn)行比較時(shí),脾臟樣本略高于腹股溝淋巴結(jié),但是把所有樣本放到一起分析時(shí),兩者之間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異不顯著。
其中a、d是所有毒株的脾臟和腹股溝淋巴結(jié)病毒載量的相關(guān)性,b、e是愛沙尼亞毒株的脾臟和腹股溝淋巴結(jié)病毒載量的相關(guān)性,c、f是強(qiáng)毒株的脾臟和腹股溝淋巴結(jié)病毒載量的相關(guān)性。
將中等毒力的ASFV愛沙尼亞2014株的病毒載量單獨(dú)分析,樣品間并沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在感染ASFV強(qiáng)毒株中,脾臟樣品的病毒載量最高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是脾臟與腹股溝淋巴結(jié)的ASFV載量的差異較小。
拋開所有,無論病毒載量高低和差異顯著與否,在全血和脾臟樣本中檢測到ASFV的樣本,在腹股溝淋巴結(jié)中的也同樣能夠檢出,表明該方法可行。
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