技術(shù)指南

為做好非洲豬瘟防控工作，指導養(yǎng)殖場及時發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟弱毒株，提升防控能力，按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部畜牧獸醫(yī)局工作安排，中國動物疫病預(yù)防控制中心聯(lián)合非洲豬瘟專業(yè)實驗室、非洲豬瘟區(qū)域?qū)嶒炇?廣州)編寫了《養(yǎng)殖場非洲豬瘟病毒弱毒株防控技術(shù)指南》，具體內(nèi)容如下。

《養(yǎng)殖場非洲豬瘟病毒弱毒株防控技術(shù)指南》

當前，我國非洲豬瘟出現(xiàn)弱毒株感染情況，生豬感染弱毒株后，水平傳播能力強、潛伏期長、帶毒排毒水平低，持續(xù)時間長且無規(guī)律，臨床呈現(xiàn)隱蔽性強、早期監(jiān)測難，對母豬群體生產(chǎn)性能影響較大等特點。為指導養(yǎng)殖場及時發(fā)現(xiàn)非洲豬瘟病毒弱毒株，提升防控能力，制定本技術(shù)指南。

一、提升臨床發(fā)現(xiàn)能力

非洲豬瘟病毒弱毒株感染臨床癥狀不典型，個體差異大。妊娠母豬表現(xiàn)反復(fù)發(fā)燒、厭食等癥狀，部分母豬流產(chǎn)、高比例死胎、乳房結(jié)痂，初生仔豬活力差。育肥群體非應(yīng)激條件下，癥狀不明顯，應(yīng)激情況下表現(xiàn)皮膚壞死斑、關(guān)節(jié)和脾臟腫大、壞死等癥狀。要強化技術(shù)培訓，提高對弱毒株識別能力。養(yǎng)殖場人員應(yīng)每日開展豬場場內(nèi)巡欄，觀察豬群臨床情況，一旦發(fā)現(xiàn)豬只出現(xiàn)可疑癥狀時，要第一時間采樣檢測。有條件的養(yǎng)殖場可使用紅外體溫監(jiān)測系統(tǒng)每天對所有豬只進行體溫監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)異常的，要及時采樣檢測。發(fā)現(xiàn)陽性和疑似病例要及時向當?shù)剞r(nóng)業(yè)農(nóng)村(畜牧獸醫(yī))部門報告，并按要求規(guī)范處置。

二、優(yōu)化監(jiān)測方案

要配合使用非洲豬瘟病毒核酸和抗體檢測，優(yōu)化監(jiān)測方案，確保監(jiān)測效果。定期開展場外環(huán)境檢測，每周對場內(nèi)門把手、風機、料槽等高風險點進行病毒核酸檢測。定期抽樣監(jiān)測母豬群及育肥群的病毒抗體情況，高風險期要考慮對母豬全群進行病毒抗體監(jiān)測。母豬分娩后，采集臍帶血、胎衣或胎衣液等樣品以及母豬深咽部拭子聯(lián)合尾根血混樣，進行病毒核酸檢測。臨床發(fā)現(xiàn)異常豬只，要立即逐頭對母豬群進行病毒核酸和抗體檢測;對育肥群開展棉繩口腔液采樣，進行病毒核酸檢測。對于病死豬，在確保養(yǎng)殖場內(nèi)生物安全的情況下，采集淋巴結(jié)、肺臟等樣品及時檢測病毒核酸。此外，豬群進行常規(guī)疫苗接種、轉(zhuǎn)群、去勢等生產(chǎn)操作后，要抽樣檢測非洲豬瘟病毒核酸。要避免過高頻次的全群普查，降低交叉污染或擴散風險。

三、科學采樣檢測

采用深咽拭子聯(lián)合尾根血混樣，或口鼻拭子聯(lián)合腹股溝淋巴結(jié)穿刺混樣的采樣方法，可提高病原檢出率。對臨床異常豬，要同時采集前腔靜脈血、尾靜脈血或耳緣靜脈血，進行病毒抗體檢測。采樣要使用聚丙烯材質(zhì)拭子，避免使用頭部為棉花制品的拭子、含海藻酸鈣拭子以及木柄拭子，防止棉花纖維對蛋白質(zhì)吸附影響病毒洗脫效果及抑制PCR反應(yīng)的物質(zhì)影響檢測結(jié)果。前腔靜脈采血時，要保證每一頭豬一個保定繩，保定繩用后放入含有消毒水的桶中消毒，避免交叉污染。

樣品保存應(yīng)使用無菌、對核酸無吸附作用的螺旋蓋塑料管。每個樣品管應(yīng)再套一個樣品袋防止樣品泄露和污染。新采集的臨床樣品應(yīng)在2～8℃下保存，采集后2～4小時內(nèi)送至實驗室。用于核酸檢測的樣品應(yīng)當盡快進行檢測，能在24小時內(nèi)檢測的樣品可置于4℃保存;24小時內(nèi)無法檢測的樣品應(yīng)置于-70℃或以下保存(如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存)。

病原檢測方法：可采用非洲豬瘟病毒(P72/CD2v/MGF)、非洲豬瘟病毒(P72/EGFP/mCherry)、非洲豬瘟病毒(P72/X64R/MGF360-14L)等三重熒光PCR方法檢測病毒核酸。必要時，需要對部分病毒基因進行序列測定，如EP402R基因。對非常見基因變異且臨床癥狀特殊病例，需進行全基因組測序鑒別?？贵w檢測方法：采用經(jīng)批準的間接ELISA、阻斷ELISA等方法或膠體金試紙條。

四、確保檢測質(zhì)量

要強化檢測人員技術(shù)能力，定期開展培訓和考核。要定期檢測PCR儀、熒光定量PCR儀等設(shè)備運行能力，及時維護保養(yǎng)。要定期參加實驗室間能力比對，日常使用標準物質(zhì)或標準樣品進行檢測質(zhì)控。要規(guī)范實驗操作，避免病毒污染。對樣品接收及處理間、試劑準備間、核酸提取和擴增間等區(qū)域以及門把手、傳遞窗、試驗臺等高風險位置應(yīng)定期采樣檢測。實驗結(jié)束后，立即清潔工作區(qū)，使用消毒液對桌面、地面、生物安全柜等進行消毒，對操作間進行紫外線照射消毒，妥善儲存開封試劑和耗材。

五、強化生物安全防護措施

落實好常態(tài)化防控措施可有效阻止非洲豬瘟病毒感染。針對弱毒株流行特點，要持續(xù)從人、車、物、豬等方面強化防控措施。

(一)人員管理。人員在進場前3天不得去養(yǎng)豬場、屠宰廠(場)、無害化處理廠、動物及動物產(chǎn)品交易市場等生物安全高風險場所。根據(jù)不同區(qū)域生物安全等級進行人員管理，人員遵循從生物安全風險低的區(qū)域向生物安全風向高的區(qū)域流動。

進入辦公/生活區(qū)域人員，要更換消毒過的衣服及鞋靴，洗手消毒并有效淋浴后，方可進場，淋浴時要尤其注意指甲清洗。實踐表明，一次有效淋浴(使用沐浴露和洗發(fā)水，且淋浴5分鐘以上)可以消除人員體表攜帶的病毒;隨身物品經(jīng)消毒后入場，嚴禁攜帶豬肉制品入場;未經(jīng)允許，禁止進入生產(chǎn)區(qū)，進入生產(chǎn)區(qū)前，人員要在生產(chǎn)區(qū)淋浴間洗澡，所攜帶物品須經(jīng)生產(chǎn)區(qū)物資消毒間消毒后，方可帶入。

進入豬舍的流程：人員按規(guī)定路線進入各自工作區(qū)域，禁止進入未被授權(quán)的工作區(qū)域。每棟豬舍入口處都應(yīng)放置消毒盆(桶)、洗手消毒盆。進出豬舍要洗手，清洗、消毒工作靴(先刷洗鞋底鞋面污物，然后在腳踏消毒盆浸泡消毒)。人員離開生產(chǎn)區(qū)時，要將工作服放置在含有消毒劑的桶中浸泡消毒，且同樣需要按要求洗澡，防止把病毒帶出。嚴禁飼養(yǎng)人員串豬舍。

(二)車輛管理。外來車輛或者去過高風險場所的本場車輛，未經(jīng)徹底清洗消毒進入養(yǎng)殖場，是病毒傳入的重要途徑。車輛要經(jīng)過徹底清洗、消毒和烘干后使用(流程包括：高壓沖洗，確保無表面污物;清潔劑處理有機物;消毒劑噴灑消毒;充分烘干)。要盡量選擇場外作業(yè)，減少車輛入場。

外來運豬車管理：外來運豬車，必須選擇在農(nóng)業(yè)農(nóng)村(畜牧獸醫(yī))部門登記備案車輛，清洗、消毒及烘干后，方可接近豬場出豬臺或中轉(zhuǎn)站(臺)。隨后對車輛所經(jīng)道路進行徹底消毒。

飼料運送車管理：飼料運送車應(yīng)停放在場區(qū)外安全距離，對車體和車輪進行消毒;卸下飼料后，由場內(nèi)人員對飼料外包裝表面消毒。建議設(shè)置中轉(zhuǎn)料塔、場內(nèi)飼料運輸車，飼料從場外直接輸送到中轉(zhuǎn)料塔，運輸車輛不必進入豬場內(nèi)。

內(nèi)部運豬車管理：選擇場內(nèi)空間相對獨立的地點進行車輛洗消和停放。運豬車使用完畢后要立即到指定地點清洗、消毒及烘干。

死豬/豬糞運輸車管理：死豬/豬糞運輸車專場專用。轉(zhuǎn)運死豬/豬糞時，避免與外部車輛接觸，運輸至死豬或豬糞暫存點，暫存點距離場區(qū)要大于100-200米。轉(zhuǎn)運后，車輛及時清洗、消毒及干燥，并消毒車輛所經(jīng)道路。

私家車管理：私家車禁止進入生產(chǎn)區(qū)和生活區(qū)，宜在距離場區(qū)外100米以上位置停放。

(三)物資管理。獸藥疫苗、飼料等生產(chǎn)物資，以及食材等生活物資，是豬場重點管理的風險物資。豬場要制定物資進場計劃,盡可能減少入場頻次，并保證每批次進場物資的消毒效果。

入場獸藥疫苗管理：嚴格執(zhí)行進場消毒，疫苗及有溫度要求的藥品，拆掉外層包裝，使用消毒劑浸泡消毒后再轉(zhuǎn)入儲存或立即使用。其他常規(guī)藥品，拆掉外層包裝，經(jīng)烘干、或熏蒸消毒，轉(zhuǎn)入儲存或立即使用。嚴格按照說明書或規(guī)程儲存、使用疫苗及藥品，疫苗瓶和注射器等醫(yī)療廢棄物應(yīng)及時進行無害化處理。豬舍內(nèi)部使用后的疫苗瓶等廢棄物，要在舍內(nèi)使用密閉袋密封，消毒劑浸泡消毒后帶出。

飼料管理：禁止從疫區(qū)購買玉米等飼料原料，確保飼料無病原污染。了解購進的全價飼料是否含有動物源性飼料添加劑，避免飼料中添加動物源性飼料添加劑。飼料經(jīng)充分干燥或加熱熟化后使用，所有飼料包裝袋均充分熏蒸消毒。

入場食材管理：在入場食材的選取上，要求食材生產(chǎn)、流通情況清晰、可控，無病原污染;禁止生鮮豬肉及制品入場;蔬菜和瓜果類食材無泥土、無爛葉，禽類和魚類食材無血水，經(jīng)食品消毒處理后入場。進入生產(chǎn)區(qū)的飯菜，應(yīng)由豬場廚房提供熟食，禁止生鮮食材進入;飯菜容器經(jīng)消毒后進入。

(四)豬群管理。要優(yōu)化管理制度，在引種、轉(zhuǎn)運、出售等高風險生產(chǎn)環(huán)節(jié)中做好全程防控管理。

避免場外散養(yǎng)或放養(yǎng)：避免場外散養(yǎng)和放養(yǎng)模式，防止家豬與野豬接觸及采食丟棄的垃圾食物。

宜實施“全進全出”管理制度：“全進全出”模式是豬場飼養(yǎng)管理、減少疫病循環(huán)傳播的有效措施，養(yǎng)殖場戶應(yīng)盡可能采取“全進全出”的飼養(yǎng)模式。

引進豬只管理：嚴格執(zhí)行引種檢測、隔離，堅持自繁自養(yǎng)。引種前需經(jīng)過非洲豬瘟等重大動物疫病檢測，抗原、抗體確認陰性，在場外或場內(nèi)特定區(qū)域?qū)嵤└綦x觀察，確認安全后方可入場。對僅飼養(yǎng)育肥豬的豬場，全部空欄消毒后再購入仔豬，要注意觀察入場后健康情況。

豬只轉(zhuǎn)運管理：豬只轉(zhuǎn)運一般包括斷奶仔豬轉(zhuǎn)運、淘汰豬轉(zhuǎn)運、育肥豬出欄轉(zhuǎn)運以及后備豬轉(zhuǎn)運。根據(jù)是否自有和可控，將運輸車輛分為兩類：自有可控車輛可在豬場進行豬只轉(zhuǎn)運。

售豬管理：禁止銷售病死豬，禁止生豬販運、承運等外來人員，以及外來拉豬車輛進入養(yǎng)殖場。避免內(nèi)外人員交叉。豬場趕豬人員嚴禁接觸出豬間(臺)靠近場外生豬車輛的一側(cè)，外來人員禁止接觸出豬間(臺)靠近場內(nèi)一側(cè)。售豬前、后，要及時對出豬間(臺)、停車處、趕豬通道和裝豬區(qū)域進行全面清洗消毒。出豬間(臺)及附近區(qū)域、趕豬通道應(yīng)硬化，方便沖洗、消毒，做好防鼠、防雨水倒流。