當(dāng)前在我國嚴(yán)重暴發(fā)的流行性腹瀉該如何防治？中國畜牧獸醫(yī)報經(jīng)長期跟蹤關(guān)注，科學(xué)分析大量臨床案例，客觀評估腹瀉產(chǎn)品療效，認(rèn)為科前生物“科瀉寧”作為全球首個流行性腹瀉變異株疫苗，在我國多個疾病暴發(fā)地成功應(yīng)用，有效防控了腹瀉。該報頭版長篇專題刊登調(diào)研成果，提出了做好腹瀉防控的科學(xué)建議。現(xiàn)轉(zhuǎn)發(fā)如下，供養(yǎng)殖朋友們參考。
本文來自《中國畜牧獸醫(yī)報》第1337期
自2010年底以來，豬流行性腹瀉（PED）在我國大規(guī)模暴發(fā)，造成7日齡內(nèi)的仔豬死亡率高達(dá)80%，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大災(zāi)難。
此后，豬流行性腹瀉在韓國、日本、泰國等亞洲國家大規(guī)模暴發(fā)，后傳播到美洲，之后又回到發(fā)源地歐洲。據(jù)統(tǒng)計，2013年4月～2014年2月，美國因 PEDV 死亡的仔豬約700萬頭。
當(dāng)前，豬流行性腹瀉已成為困擾我國養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。2010年底以來，按照我國每年出欄7億頭豬計算，包括仔豬損失和飼養(yǎng)成本在內(nèi)，每年因豬流行性腹瀉病給養(yǎng)豬業(yè)造成的損失高達(dá)上千億元。
目前豬流行性腹瀉形勢如何？華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物疫病診斷中心的統(tǒng)計數(shù)據(jù)一定程度上說明了問題——
在華中農(nóng)大動物診斷中心8萬份腹瀉病料中，發(fā)生腹瀉的豬場危害最大的病原還是流行性腹瀉。在2015年對送檢的875個仔豬發(fā)生腹瀉的豬場中，發(fā)生流行性腹瀉的豬場有726個，即83%送檢的豬場發(fā)生流行性腹瀉。2016年863個疑似發(fā)生腹瀉的豬場當(dāng)中，74%的豬場發(fā)生了流行性腹瀉。
2013-2016年豬流行性腹瀉病毒（PEDV）檢出率
難治之病
“不具有季節(jié)性，尤其是冬春季發(fā)病率高，5～9月份也呈常態(tài)化發(fā)?。灰赘胸i群范圍擴(kuò)大，除了產(chǎn)房小豬，斷奶仔豬、肥豬、母豬都會發(fā)??；高發(fā)病率、高死亡率；經(jīng)典毒株疫苗免疫效果不佳；易反復(fù)、持續(xù)時間長。這些可歸納為我國豬流行性腹瀉的主要特點?！蔽錆h科前生物股份有限公司常務(wù)副總經(jīng)理徐高原博士告訴記者。
為什么這種流行性腹瀉的防控困難重重？徐高原博士稱，主要原因在于腹瀉病因多樣，難以鑒別診斷；疫苗毒株不匹配；現(xiàn)有商品化疫苗抗原含量不夠；缺乏統(tǒng)一的免疫評價標(biāo)準(zhǔn)。
仔豬腹瀉病原復(fù)雜、病因多樣，剖檢難以鑒別，需結(jié)合豬群流行病學(xué)調(diào)查、組織病理學(xué)剖檢和實驗室病原檢測等進(jìn)行確診。
疫苗毒株不匹配。2010年10月以來，我國臨床分離的豬流行性腹瀉病毒遺傳關(guān)系分析表明：2010年以來流行毒株主要為基因Ⅱ群，屬PEDV變異毒株。2008年分離株、疫苗毒株CV777、韓國疫苗毒株DR13都是基因Ⅰ群，屬常規(guī)經(jīng)典毒株。研究證實，Ⅱ群豬流行性腹瀉病毒和Ⅰ群毒株遺傳關(guān)系很遠(yuǎn)，這也是現(xiàn)有疫苗難以提供免疫保護(hù)的主要原因。大量臨床案例發(fā)現(xiàn)，免疫過PEDV經(jīng)典毒株，病毒含量甚至達(dá)到 108.0TCID50/ml疫苗的豬場也未能避免病毒性腹瀉疫情，證實了經(jīng)典毒株疫苗對最新流行變異毒株不能提供完全保護(hù)。
現(xiàn)有商品化疫苗抗原含量不夠。目前國內(nèi)雖有多家商品化豬傳染性腸胃炎（TGE）、豬流行性腹瀉疫苗，但因為腹瀉病毒存在培養(yǎng)技術(shù)瓶頸，在細(xì)胞上增殖滴度低，傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶生產(chǎn)工藝病毒含量難以達(dá)到 107.0TCID50/ml以上，直接影響了腹瀉疫苗大規(guī)模生產(chǎn)和有效免疫保護(hù)力的產(chǎn)生，導(dǎo)致疫苗效果不明顯，甚至無效。另外，臨床最新PEDV變異毒株體外培養(yǎng)細(xì)胞適應(yīng)性差，制約了相關(guān)實驗室從臨床上分離、培養(yǎng)出變異毒株。
缺乏統(tǒng)一的免疫評價標(biāo)準(zhǔn)。母豬的免疫接種是防止PEDV流行和暴發(fā)的基本方法，新生仔豬吸吮免疫母豬的初乳和乳汁獲得特異性中和抗體，從而避免 PEDV的感染。但疫苗的功效與免疫豬群獲得特異性抗體整齊度及滴度相關(guān)，豬群特異性中和抗體整齊、滴度高可快速有效清除機(jī)體攜帶的野毒，阻止豬只排毒、散毒，避免PEDV反復(fù)感染，特別是對新生仔豬的危害。母乳中特異性中和抗體滴度決定了新生仔豬獲得免疫保護(hù)的時長和有效保護(hù)力。研究證實：豬流行性腹瀉的中和抗體達(dá)到 1:16，豬傳染性胃腸炎的中和抗體達(dá)到 1:32，豬只才可獲得完全保護(hù)。
不一樣的腹瀉
2010年以來新一輪腹瀉在國內(nèi)豬場暴發(fā)后，經(jīng)典疫苗免疫效果大幅降低，國內(nèi)相關(guān)學(xué)者懷疑是出現(xiàn)了高致病性毒株。
國內(nèi)專家根據(jù)豬流行性腹瀉病毒（PEDV）的遺傳進(jìn)化樹分析，目前在全球存在的豬流行性腹瀉病毒（PEDV）主要分為三大類：1970～2010年，主要流行經(jīng)典毒株（G1亞群）；2010～至今，主要流行變異毒株（G2亞群），2014年以來美國新發(fā)腹瀉屬于S-INDEL毒株，而當(dāng)前主要流行毒株為G2亞群，占比90%以上。
面對豬流行性腹瀉肆虐，美國等其他國家防控措施主要有三種：采用自家苗：受到抗原量和滅活程度的影響，對豬場危害巨大；返飼：加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，阻斷傳播途徑，控制生物安全。雖有一定的效果，但會導(dǎo)致反復(fù)；進(jìn)行疫苗免疫：美國暴發(fā)PED后其農(nóng)業(yè)部發(fā)布聯(lián)邦政令，設(shè)立了包括PEDV、PDCoV在內(nèi)的腹瀉腸道冠狀病毒病例報告機(jī)制，并撥款2600多萬美元，用于檢測防治工作，后來采用政府臨時批準(zhǔn)的PEDV變異毒株全病毒滅活疫苗，有效控制了豬流行性腹瀉疫情。韓國、日本等國家采用了4種商品化疫苗（KPED-9、DR13、P-5V、SM98-1），但均不能對流行毒株提供有效保護(hù)。
與美國不同的是，雖然其發(fā)生的流行毒株和我國流行的毒株都屬變異毒株，但美國流行毒株起先為G2亞群，后期又出現(xiàn)S-INDEL毒株，而我國流行的毒株一直為G2亞群。
“疫苗病毒含量一定程度上影響疫苗的質(zhì)量，但疫苗毒株類型發(fā)揮著最關(guān)鍵的作用?！遍L江學(xué)者、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)教授肖少波稱。
肖少波教授通過對比最新分離毒株與經(jīng)典毒株的基因序列發(fā)現(xiàn)，PEDV從歐洲傳入亞洲后發(fā)生了變異，主要體現(xiàn)在S基因上，與PEDV經(jīng)典毒株相比，PEDV變異毒株存在3個插入?yún)^(qū)域（3個堿基、9個堿基、3個堿基）和1個缺失區(qū)域（6個堿基），這也是經(jīng)典毒株疫苗（CV777）對現(xiàn)有變異毒株腹瀉難以提供有效保護(hù)的主要原因，這為尋找該病的有效解決方案奠定了堅實基礎(chǔ)。
突破性新藥
自2011年以來，我國先后有近30家企業(yè)獲批生產(chǎn)豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)疫苗，其中還包括加入了輪狀病毒的三聯(lián)苗，可是一直沒有批準(zhǔn)變異毒株腹瀉疫苗，直到2016年武漢科前生物股份有限公司變異株腹瀉苗“科瀉寧”的出現(xiàn)。
徐高原博士稱，以變異株疫苗為代表的新型豬腹瀉疫苗創(chuàng)制的難點在于，臨床最新流行的變異PEDV毒株細(xì)胞受體發(fā)生了變化，制約了臨床上分離、培養(yǎng)變異的豬流行性腹瀉病毒毒株；最新流行變異PEDV毒株在體外規(guī)模培養(yǎng)工藝難以突破，培養(yǎng)的病毒滴度難以達(dá)到制苗要求。
為此，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物傳染病實驗室和武漢科前生物股份有限公司成立了以肖少波教授為負(fù)責(zé)人的創(chuàng)新團(tuán)隊。經(jīng)過近7年的研發(fā)，在國內(nèi)率先攻克了分離、培養(yǎng)PEDV變異毒株技術(shù)難題。最終在豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉二聯(lián)滅活疫苗的研發(fā)上獨樹一幟，研發(fā)出了全球首個正式獲批的變異株腹瀉苗，該成果具有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，一舉突破五大難題。
徐高原博士介紹，一是，突破了變異PEDV難以分離的技術(shù)難題。變異豬傳染性胃腸炎病毒TGEV（WH-1株）和豬流行性腹瀉病毒PEDV（AJ1102株）分別于2010年和2011年分離于中國臨床發(fā)病豬場，屬當(dāng)前中國最新流行變異毒株。二是，突破了變異PEDV高滴度大規(guī)模培養(yǎng)工藝。采用片狀載體懸浮培養(yǎng)，克服了PEDV難以培養(yǎng)的困難，顯著地提高了病毒滴度，在國內(nèi)外屬病毒含量最高，其TGEV抗原含量可達(dá)108.0TCID50/ml以上，PEDV抗原含量可達(dá)107.5TCID50/ml以上。三是，突破了以往疫苗副反應(yīng)較強(qiáng)的技術(shù)難題。采用片狀載體懸浮培養(yǎng)技術(shù)，沒有細(xì)胞成分，無血清成分，高效激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生高滴度特異性抗體，減少應(yīng)激，提高了疫苗的安全性。四是，突破了以往疫苗注射途徑的局限性。以往的腹瀉疫苗基本采用后海穴注射，而本疫苗是肌肉注射、操作方便，抗體整齊。五是，突破了以往疫苗免疫期短的技術(shù)難題，采用獨特的免疫增強(qiáng)劑和進(jìn)口雙相佐劑，疫苗免疫持續(xù)時間長。疫苗可同時高效保護(hù)種豬和仔豬。
根據(jù)華中農(nóng)大動物疫病診斷中心對腹瀉病料檢出率的情況看：腹瀉病料中82.1%檢出PEDV，1.9%檢出輪狀病毒（RV），1.1%檢出TGEV。而科前生物此款變異株腹瀉疫苗只是傳染性胃腸炎和腹瀉的二聯(lián)疫苗，沒有加入輪狀病毒組成三聯(lián)疫苗。對此，肖少波稱，選擇不加輪狀病毒，因為其對疫苗腹瀉抗體產(chǎn)生部分消解，有減抗作用。
與市場上其他廠家的豬腹瀉疫苗相比，此款新藥最重要的區(qū)別是：采用的毒株和病毒培養(yǎng)工藝不同。據(jù)介紹，“科瀉寧”的PEDV采用的是最新流行的變異毒株、分離于2011年2月份，所以叫AJ1102，TGEV也是采用分離于2010年的新毒株；而其他疫苗毒株都是采用經(jīng)典毒株?！翱茷a寧”的PEDV采用的是片狀載體懸浮培養(yǎng)技術(shù)，其他疫苗病毒培養(yǎng)工藝都是采用傳統(tǒng)轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)技術(shù)。
“這些創(chuàng)造性的技術(shù)突破告訴我們，做疫苗要勇于進(jìn)行技術(shù)創(chuàng)新，這樣才能生產(chǎn)出好的產(chǎn)品，公司才能走得更長遠(yuǎn)?！毙旄咴┦糠Q，科前生物的豬腹瀉活疫苗預(yù)計今年年底上市?！翱茷a寧”滅活疫苗和豬腹瀉活疫苗研制上的區(qū)別主要表現(xiàn)在活疫苗的體外傳代致弱技術(shù)、病毒保護(hù)劑及凍干技術(shù)。
豬病的免疫預(yù)防是一項復(fù)雜的工作，作為一種新疫苗，“科瀉寧”是否可以與市場上已有的豬腹瀉活疫苗聯(lián)用，有哪些免疫程序和注意事項？
徐高原博士表示可以聯(lián)用。免疫程序有產(chǎn)前35天跟胎免疫：活+滅，間隔15后用滅活疫苗加強(qiáng)免疫；產(chǎn)前35天跟胎免疫滅活苗，間隔15天后加強(qiáng)免疫活疫苗+滅活疫苗；全場普免活+滅，間隔1個月后加強(qiáng)免疫活+滅。注意兩個活疫苗免疫間隔時間最少需要20天才能加強(qiáng)免疫，而兩個滅活疫苗之間只需要間隔7天。另外，產(chǎn)品使用之前要注意徹底回溫、搖勻，先小群體使用觀察有沒有應(yīng)激反應(yīng)，如果沒有再大群體使用。
受益的養(yǎng)殖者
目前，眾多養(yǎng)殖企業(yè)和養(yǎng)殖場（戶）對這款突破性變異株疫苗產(chǎn)品表現(xiàn)出了積極的關(guān)注和比較廣泛的認(rèn)可。
在湖北武漢，作為一個養(yǎng)豬30多年的老養(yǎng)豬人——武漢金龍畜禽有限公司董事長雷賢忠稱，豬場在2015年末2016年初，也沒能抵擋住流行性腹瀉的巨大沖擊，14個豬場中有兩個場開始大范圍死豬。無奈之下使用了科前生物變異株腹瀉苗，做了第一個吃螃蟹的人，如今變異株疫苗給他帶來了實實在在的效益。
今年1月，在安徽宿州，一規(guī)?；i場2～3日齡新生仔豬陸續(xù)出現(xiàn)嘔吐、腹瀉癥狀，在7日齡死亡率較高，發(fā)病仔豬整窩整窩死亡，死亡率達(dá)100%。據(jù)了解，該豬場飼養(yǎng)種豬500頭左右，2016年9月份開始免疫流行性腹瀉三聯(lián)活疫苗（經(jīng)典毒株CV777）和自家苗，間隔1個月普免第二次，母豬產(chǎn)前跟胎兩次（40天和20天）。2017年1月份中旬，場里新生仔豬在2～3日齡出現(xiàn)上吐下瀉癥狀，7日齡左右出現(xiàn)整窩脫水死亡現(xiàn)象，死亡率達(dá)100%。結(jié)合臨床癥狀及場里以往發(fā)病史，最終確定該豬場腹瀉是由流行性腹瀉引起的。
除了在環(huán)境衛(wèi)生、發(fā)病仔豬處理上進(jìn)行了防護(hù)，科前生物技術(shù)人員還建議進(jìn)行疫苗緊急免疫，母豬群進(jìn)行普免科瀉寧2頭份（4ml），妊娠后期母豬產(chǎn)前跟胎免疫兩次（40天和20天），剛出生仔豬免疫半頭份（1ml）。兩周后，據(jù)該豬場反饋，前期發(fā)病仔豬死亡率降低，部分已恢復(fù)，后期新生仔豬未發(fā)生腹瀉。
在廣東湛江，某規(guī)模豬場自繁自養(yǎng)存欄母豬2000頭。今年3月，該場新生仔豬出現(xiàn)劇烈腹瀉，部分豬有嘔吐現(xiàn)象，7日齡內(nèi)仔豬死亡率可達(dá)100%。個別母豬也會表現(xiàn)出臨床癥狀，諸如發(fā)病初期母豬精神沉郁，采食量下降甚至食欲廢絕，1～2天后開始出現(xiàn)腹瀉，一般1～3天可以自行康復(fù)。
發(fā)病后，經(jīng)技術(shù)人員初步診斷為豬流行性腹瀉?？紤]到該豬場豬瘟抗體不理想，檢測還發(fā)現(xiàn)豬藍(lán)耳病和圓環(huán)病均呈弱陽性，技術(shù)人員提出了免疫建議：對全場仔豬緊急接種科前生物的“科瀉寧”1頭份+豬瘟苗2頭份，新生仔豬做豬瘟超免1頭份+“科瀉寧”1頭份，全場母豬緊急免疫豬瘟2頭份，一周后做“科瀉寧”二免。針對藍(lán)耳病的情況，全群母豬使用泰萬菌素+清瘟敗毒散+阿莫西林拌料防止繼發(fā)感染，連續(xù)3個月，每月連喂10天。10天后，當(dāng)技術(shù)人員進(jìn)行電話回訪獲知，該場疫情已得到控制，新出生仔豬沒有出現(xiàn)腹瀉現(xiàn)象，產(chǎn)房發(fā)病仔豬也得到了康復(fù)。
在河北保定，今年2月滿城區(qū)某150頭母豬規(guī)模養(yǎng)殖場發(fā)生疑似仔豬腹瀉。2月4日波及全場，癥狀為水樣腹瀉、糞便腥臭、且哺乳仔豬死亡率高達(dá)80%以上。采集兩頭腹瀉死亡哺乳仔豬作病料檢測結(jié)果證實為豬流行性腹瀉暴發(fā)。
在科前生物技術(shù)人員的指導(dǎo)下，該場對母豬群全群普免科瀉寧1頭份，間隔2周加強(qiáng)免疫一次，產(chǎn)前15天以內(nèi)懷孕母豬緊急免疫2頭份，哺乳仔豬免疫1頭份。產(chǎn)房溫度控制為22℃左右，保溫箱懸掛保溫?zé)舯?，保持溫?0℃左右。保持產(chǎn)房、產(chǎn)床、保溫箱的清潔干燥，適當(dāng)通風(fēng)。結(jié)果哺乳仔豬仍有輕微腹瀉，除部分極度消瘦的仔豬死亡外，其他仔豬未再繼續(xù)傷亡。輕微腹瀉于3～4天后停止，15日母豬分娩一窩頭，仔豬健康，未發(fā)生腹瀉。該豬場老板對疫苗效果很滿意。
“疫苗是最經(jīng)濟(jì)最有效的解決辦法，但生物安全是第一位的?！毙ど俨ń淌诟嬖V記者。
由于PED發(fā)病快、死亡率高，因此在做好疫苗免疫的同時，還要做好飼養(yǎng)管理和生物安全。徐高原博士表示，只有通過綜合的防控措施才能更好地防控豬流行性腹瀉。
編輯：姚紅
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