日本專家建立了可用于分離非洲豬瘟病毒的永生化豬腎巨噬細(xì)胞細(xì)胞系

非洲豬瘟病毒(ASFv)是導(dǎo)致非洲豬瘟的病原體，可以導(dǎo)致一種家豬和野豬出血性的烈性致死傳染病。該病毒主要感染不能在體外生長(zhǎng)的豬巨噬細(xì)胞和豬單核細(xì)胞。盡管近年來(lái)許多科學(xué)家就建立一個(gè)可以穩(wěn)定的可用于非洲豬瘟病毒分離的細(xì)胞系做出了諸多努力，但是這些細(xì)胞系僅支持有限的低病毒復(fù)制水平并且大部分是人工減毒的毒株。

近期發(fā)表在《自然》雜志上的最新研究進(jìn)展為非洲豬瘟病毒分離提供了可能的新的思路。日本動(dòng)物衛(wèi)生研究做評(píng)估了新型永生化豬腎巨噬細(xì)胞(IPKM)支持非洲豬瘟病毒感染的能力。研究證明IPKM細(xì)胞系可促進(jìn)非洲豬瘟病毒(Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株)高水平復(fù)制(>107.0TCID50/mL)。接種豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)后可觀察到紅細(xì)胞吸附實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞病變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明IPKM可作為非洲豬瘟病毒分離、復(fù)制、基因操作和疫苗生產(chǎn)等研究的備選細(xì)胞系。

研究發(fā)現(xiàn)

01 IPKM對(duì)非洲豬瘟病毒易感

非洲豬瘟病毒(Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株和Espana75毒株)接種IPKM細(xì)胞系后16小時(shí)未見(jiàn)明顯細(xì)胞病變，但在核周圍檢測(cè)到熒光信號(hào)證明IPKM對(duì)非洲豬瘟病毒強(qiáng)毒株易感。

02 非洲豬瘟接種IPKM后可被檢出：

在病毒感染系數(shù)0.1的情況下接種IPKM細(xì)胞系，Armenia07毒株，Kenya05/Tk-1毒株在接種后2天出現(xiàn)細(xì)胞病變，Espana75毒株在接種3天后出現(xiàn)細(xì)胞病變。細(xì)胞病變呈現(xiàn)為IPKM呈圓形，3至20個(gè)細(xì)胞聚集呈葡萄狀。

03 病毒生長(zhǎng)曲線表明非洲豬瘟病毒在IPKM細(xì)胞系上的繁殖速度等于或稍優(yōu)于PAM細(xì)胞系

圖1：四個(gè)非洲豬瘟毒株在IPKM和PAM細(xì)胞系上的生長(zhǎng)曲線圖

04 非洲豬瘟病毒在IPKM細(xì)胞系上連續(xù)傳代10次后在CP530R區(qū)域發(fā)生一個(gè)位點(diǎn)的突變

研究者對(duì)Armenia07毒株在IPKM細(xì)胞系連續(xù)傳代0、5、10、15代后得到的毒株進(jìn)行了測(cè)序，結(jié)果表明第10代和第15代的毒株在CP530R區(qū)域發(fā)生一個(gè)位點(diǎn)的突變。