摘要：為了解屠宰場(chǎng)非洲豬瘟病毒（ASFV）污染情況，評(píng)估其潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)，2018 年 10 月，在湖南省 86 個(gè)屠宰場(chǎng)采集樣品 895 份，使用熒光 PCR 方法進(jìn)行 ASFV 核酸檢測(cè)。結(jié)果顯示，11 個(gè)屠宰場(chǎng)的 43 份樣品呈 ASFV 核酸陽(yáng)性，場(chǎng)陽(yáng)性率為 12.8%，樣品陽(yáng)性率為 4.8%。調(diào)查分析表明，ASFV 陽(yáng)性屠宰場(chǎng)與是否屠宰過(guò)來(lái)自疫點(diǎn)的生豬及場(chǎng)內(nèi)環(huán)境、工具、車輛的消毒情況相關(guān)。調(diào)查提示，屠宰場(chǎng)應(yīng)繼續(xù)加大 ASFV 自檢力度，政府和主管部門需繼續(xù)加強(qiáng)檢疫監(jiān)管，以降低 ASF 擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)。

非洲豬瘟（African swine fever，ASF） 是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virusASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，對(duì)染疫國(guó)家的生豬產(chǎn)業(yè)和相關(guān)國(guó)際貿(mào)易影響巨大，是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）的須通報(bào)動(dòng)物疫病，屬于我國(guó)一類動(dòng)物疫病。ASFV 宿主是家豬和野豬，不感染人，主要通過(guò)間接和直接接觸傳播，發(fā)病豬、隱性感染豬及其排泄物、污染物以及軟蜱等媒介吸血昆蟲(chóng)是其主要傳染源。自 2018 年 8 月，ASF 疫情首次在遼寧省發(fā)現(xiàn)以來(lái)，短期內(nèi)在全國(guó)多個(gè)省份接連發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致大量生豬被撲殺，經(jīng)濟(jì)損失慘重。2018 年 10 月湖南省發(fā)現(xiàn)首起 ASF 疫情，且在 1 個(gè)月內(nèi)連續(xù)發(fā)現(xiàn) 7 起， 給該省生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重打擊。為了解湖南省屠宰場(chǎng) ASFV 污染情況，在疫情暴發(fā)期內(nèi)，對(duì)湖南省疫點(diǎn)、疫區(qū)以及非疫區(qū)屠宰場(chǎng)開(kāi)展了 ASFV 監(jiān)測(cè)，以期為評(píng)估 ASFV 潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018 年 10 月，在湖南省 3 個(gè) ASF 疫區(qū)市、2 個(gè)非疫區(qū)市 86 個(gè)屠宰場(chǎng)，選擇待宰圈、電麻前生豬通道、放血槽、盛血器、脫毛池、屠宰場(chǎng)總排水溝、屠宰線、肉品存儲(chǔ)庫(kù)等不同生產(chǎn)環(huán)節(jié)，采集樣品 895 份，其中環(huán)境拭子樣品 757 份、豬血樣品17 份、豬肉樣品 109 份以及屠宰場(chǎng)內(nèi)加工的香腸 8份、臘肉 4 份。

1.2 試劑

ASFV 熒光 PCR 檢測(cè)引物和探針：由中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心提供；熒光 PCR 擴(kuò)增試劑盒：購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；病毒 RNA/DNA 提取試劑盒：購(gòu)自蘇州天隆生物科技股份公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

NP968 核酸提取儀：西安天隆；ABI 7500fast熒光 PCR 儀： 賽默飛； 生物安全柜： 美國(guó)BAKER；高壓滅菌鍋：上海申安。

1.4 樣品處理和檢測(cè)

按中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心編制的《非洲豬瘟實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)操作程序》進(jìn)行樣品處理、熒 光 PCR 擴(kuò)增、結(jié)果判定和廢棄物處置，按照 RNA/ DNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取核酸。

1.5 屠宰場(chǎng)清洗消毒

待宰圈舍、進(jìn)豬通道、卸豬臺(tái)、淋浴間等區(qū)域，每循環(huán) 1 次，徹底清理 1 次糞便，清水沖洗后 用 2%~5% 燒堿液噴灑，30 min 后再用清水沖洗；屠宰、分割加工車間，每次生產(chǎn)結(jié)束后先用清水沖洗，再用 0.1%~0.2% 的戊二醛噴霧消毒，30 min 后用清水沖洗。

1.6 陽(yáng)性屠宰場(chǎng)檢測(cè)

根據(jù)《湖南省防治重大動(dòng)物疫病指揮部辦公室關(guān)于因非洲豬瘟關(guān)聯(lián)暫停的屠宰場(chǎng)恢復(fù)生產(chǎn)有關(guān)事項(xiàng)的通知》（湘防重病辦﹝2018﹞15號(hào)）的規(guī)定， 暫停疫情縣以外、與疫點(diǎn)有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)的 ASFV檢測(cè)陽(yáng)性屠宰場(chǎng)的屠宰活動(dòng) 15 d，在此期間進(jìn)行徹底清洗消毒，分別于暫停屠宰后 5、10、14 d，在待宰圈、屠宰間、放血槽、打毛間、總排水口等 5個(gè)部位，各采集 5 份環(huán)境樣品，共 25 份 / 次進(jìn)行ASFV 檢測(cè)。

2 檢測(cè)結(jié)果

2.1 總體情況

86 個(gè)屠宰場(chǎng)的 895 份樣品中，11 個(gè)場(chǎng)的 43 份樣品為 ASFV 核酸陽(yáng)性，場(chǎng)陽(yáng)性率為 12.8%，樣品陽(yáng)性率為 4.8%。43 份陽(yáng)性樣品包括 36 份環(huán)境 拭子樣品、1 份豬肉樣品、5 份香腸樣品、1 份臘肉樣品，其中陽(yáng)性環(huán)境拭子主要采自屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池、生豬清洗間等位置。不同類型屠宰場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表 1，不同類型樣品檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 屠宰場(chǎng)清洗效果

1 個(gè)疫情無(wú)關(guān)聯(lián)陽(yáng)性屠宰場(chǎng)（正常屠宰），首次采樣（在待宰圈、放血槽、盛血器、電麻前生豬通道、屠宰場(chǎng)總排水溝、屠宰線、脫毛池等7 個(gè)工作地，每個(gè)地點(diǎn)隨機(jī)采集環(huán)境拭子 3 份）2 d 后，再次采樣（7 個(gè)環(huán)節(jié)，每個(gè)環(huán)節(jié) 5 份，共35份）檢測(cè)，結(jié)果全為陰性。其間屠宰場(chǎng)按日常清洗消毒程序，其清洗消毒2次。另外10 個(gè)暫停屠宰的陽(yáng)性屠宰場(chǎng)，其間共清洗消毒 3 次，每次檢測(cè)均為陰性。

3 分析與討論

本次監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，屠宰場(chǎng)內(nèi)的 ASFV 樣品陽(yáng)性率為 4.8%，場(chǎng)陽(yáng)性率為 12.8%，表明屠宰環(huán)節(jié)存在 ASFV 污染。疫情關(guān)聯(lián)屠宰場(chǎng)陽(yáng)性率（75.0%） 遠(yuǎn)高于疫點(diǎn)縣屠宰場(chǎng)（0）和疫情無(wú)關(guān)聯(lián)屠宰場(chǎng) （2.9%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明屠宰場(chǎng) ASFV 污染與屠宰疫點(diǎn)養(yǎng)豬場(chǎng)生豬直接關(guān)聯(lián)，這也符合 ASF 高度接觸傳播的流行病學(xué)特征。

AFSV 抵抗力強(qiáng)，在外界可長(zhǎng)期存活，任何與感染生豬接觸的行為均有引發(fā) ASF 疫情的風(fēng)險(xiǎn)。本次檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的 43 份陽(yáng)性樣品中，有 36 份（83.7%）為環(huán)境拭子樣品，表明病毒一旦隨生豬進(jìn)入屠宰場(chǎng)，就會(huì)潛入屠宰間、放血槽、排水溝、脫毛池等區(qū)域，繼而污染整個(gè)屠宰環(huán)節(jié)。如果屠宰場(chǎng)與養(yǎng)殖場(chǎng)之間存在運(yùn)輸人員、車輛、工具等的頻繁接觸，那么病毒匯集、擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)巨大，如果不經(jīng)過(guò)嚴(yán)格消毒，就會(huì)使病毒進(jìn)一步擴(kuò)散。從湖南省屠宰場(chǎng)的消毒監(jiān)測(cè)效果看，通過(guò)嚴(yán)格和規(guī)范的消毒，可以有效殺滅 ASFV。因此，要做好屠宰場(chǎng)內(nèi)環(huán)境、運(yùn)輸車輛的清洗消毒工作，確保病原在屠宰場(chǎng)內(nèi)不交叉、不回流。

監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，屠宰場(chǎng)豬肉樣品陽(yáng)性率為0.9%，表明屠宰場(chǎng)豬肉產(chǎn)品存在 ASFV 污染風(fēng)險(xiǎn)，其原因與屠宰了隱性帶毒豬以及屠宰場(chǎng)的病毒污染有關(guān)。另外，監(jiān)測(cè)的所有香腸、臘肉樣品均來(lái)自于同一個(gè)疫情關(guān)聯(lián)屠宰（加工）企業(yè)。溯源調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在采樣監(jiān)測(cè)前，該場(chǎng)多次宰殺來(lái)自疫情場(chǎng)的生豬，因此及時(shí)開(kāi)展疫情場(chǎng)的外調(diào)記錄調(diào)查，追蹤屠宰場(chǎng)的動(dòng)物產(chǎn)品流向，將有助于降低病毒經(jīng)產(chǎn)品擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)。

此外，從與疫點(diǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)屠宰場(chǎng)的環(huán)境、豬肉及其制品監(jiān)測(cè)結(jié)果可以看出，屠宰場(chǎng)是 ASF 防控的關(guān)鍵主體。如果屠宰場(chǎng)屠宰了隱性帶毒生豬，病毒就會(huì)進(jìn)入產(chǎn)品并長(zhǎng)時(shí)間存活，這會(huì)給 ASF 防控和凈化帶來(lái)更大困難。因此，建議根據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部統(tǒng)一部署，要求屠宰企業(yè)繼續(xù)加大ASFV 自檢力度，政府和技術(shù)部門加強(qiáng)指導(dǎo)和監(jiān)督，把好屠宰檢疫關(guān)。

4 結(jié)論

本監(jiān)測(cè)利用熒光 PCR 方法，對(duì)湖南省86個(gè)屠宰場(chǎng)進(jìn)行 ASFV 核酸檢測(cè)，在11個(gè)屠宰場(chǎng)的43份樣品中檢測(cè)出核酸陽(yáng)性，場(chǎng)陽(yáng)性率為12.8%，樣品陽(yáng)性率為 4.8%，表明屠宰場(chǎng)存在 ASFV 污染，其來(lái)源主要與屠宰疫情養(yǎng)殖場(chǎng)生豬有關(guān)。屠宰場(chǎng)的日常清洗消毒，可有效消除病毒，對(duì)于 ASF 防控具有積極意義。因此，屠宰場(chǎng)應(yīng)加強(qiáng) AFS 自檢工作，堅(jiān)持日常清洗消毒制度，阻斷病毒通過(guò)屠宰產(chǎn)品再次擴(kuò)散傳播。