非洲豬瘟病毒,根據(jù)其致病力的不同,可分為高致病性、中等致病性和低致病性三類。高致病性毒株能造成嚴重的急性病癥,并在感染后4-15天達到90-100%的死亡率;中等毒性的毒株死亡率在30-70%;低致病性毒株的死亡率在10-30%。
中低等級感染后存活下來的豬只是否長期帶豬并向外界排毒,這是長期爭論的焦點。德國弗里德里?!だ辗蚶昭芯吭涸\斷病毒所的研究人員給出了自己的實驗結(jié)論。
實驗中,研究人員選取了36頭非瘟病毒檢測陰性、非瘟抗體檢測陰性的5-6月豬,其中30頭作為攻毒豬,用分離于荷蘭的中等毒性的 Netherlands’86 毒株通過病毒培養(yǎng)上清液滴鼻的方式進行接種感染,稱為C型豬。C型豬隨機分為三組,每組10頭,分別關(guān)在一個豬舍三個獨立的大欄中。
剩余6頭不接種病毒,用于在C型豬感染后期與其同欄飼養(yǎng),檢測感染后期C型豬的感染能力,稱為S型豬。

感染后,C型豬每天檢測直腸溫度并觀察臨床現(xiàn)象。如果溫度兩天以上達到40度,則確認為發(fā)燒。臨床觀測癥狀包括:活潑度、耐受度、呼吸頻率、步態(tài)、皮膚、眼睛、臉頰和采食量等,并建立評分系統(tǒng)。
為了評判感染后豬只病毒血癥、排毒和免疫應(yīng)答的程度,在感染第3,7,10,14,20,29,42,48,63和91天抽取前腔靜脈血進行化驗。
同一時間,為了檢測感染豬只排毒情況,用棉簽拭子收集包括糞便樣品、唾液和口咽部樣品在內(nèi)的拭子樣品,用作qPCR檢測。從105天到126天,拭子樣品每周收集一次。
99天后,幸存的19頭C型豬與6頭S型豬混養(yǎng),每組放2頭S型豬,并按原本實驗設(shè)計收集各類檢測樣品。164/165天后,所有存活的C型豬和S型豬解剖采集組織樣品檢測,包括:扁桃體、唾液腺、脾臟、肺臟和下頜淋巴結(jié),以及腹股溝、肝、腎、腸胃、肺等多處淋巴結(jié)。
所有拭子樣品、血液樣品和組織樣品中病毒的都要用實時定量PCR檢測,抗體用ELISA檢測。為了檢測血液和組織中有活性的病毒,應(yīng)用血細胞吸附實驗檢測。
中等毒性的 Netherlands’86毒株感染后的C型豬表現(xiàn)出多種不同臨床癥狀,包括急性致死、延遲致死、慢性病癥,以及最終恢復(fù)等。

多數(shù)豬只在感染4-6天,出現(xiàn)發(fā)燒癥狀。在急性死亡的豬只身上,臨床癥狀表現(xiàn)為萎靡不振、結(jié)膜炎、不采食、便秘、皮膚變紅,特別在耳朵和眼睛區(qū)域;發(fā)燒41.8℃,一些豬在高燒5天后出現(xiàn)中樞神經(jīng)障礙癥狀。急性癥狀平均持續(xù)8-10天。該階段死亡的豬,解剖發(fā)現(xiàn)多個臟器出血:外周淋巴結(jié)腫脹和出血,腎臟出血點和肺部水腫。
所有30頭C型豬在滴鼻感染一段時間后,抽血做qPCR檢測都檢出陽性,第一次檢測出陽性的時間在感染后3-21天之間。在第10和14天,血液中病毒含量最大。在感染第42天,6頭C型豬第一次qPCR檢測結(jié)果呈陰性,第48天7頭,第63天10頭結(jié)果陰性。到了第91天,盡管52%的C型豬仍舊陽性,但病毒載量降低了(Cq 28-30)。
同時間的30頭C型豬血樣HAT檢測(HAT檢測陽性說明ASFV有感染活性)發(fā)現(xiàn),血清HAT檢測結(jié)果與血液PCR結(jié)果一致,大多數(shù)HAT檢測陽性結(jié)果出現(xiàn)在14天感染。有趣的是,HAT第一例陰性結(jié)果出現(xiàn)在29天,隨后大量存活的C型豬出現(xiàn)HAT陰性,到了第63天所有存活的C型豬檢測陰性。這可能表明存活的非瘟感染豬喪失感染能力要早于核酸檢測陰性結(jié)果出現(xiàn)。

棉簽拭子采樣檢測結(jié)果顯示感染ASFV的C型豬排毒情況??谇皇米訕悠穛PCR檢測在感染第3天出現(xiàn)陽性結(jié)果(兩頭豬)。在第7和10天,絕大多數(shù)的口腔拭子樣品出現(xiàn)陽性(Cq在30-41間)。從第14天開始,陽性拭子樣品數(shù)量開始減少,到第21和29天,只有1個樣品呈現(xiàn)陽性,到了第42天,所有的口腔拭子樣品呈現(xiàn)陰性。唾液樣品與口腔拭子結(jié)果一致,在7-10天出現(xiàn)陽性結(jié)果高峰,在14天開始減少。不同的是,唾液樣品病毒載量更多,持續(xù)時間更長。糞便樣品中的病毒含量更低,最后的陽性樣出現(xiàn)在第29天。

ELISA檢測感染豬抗體情況。第一批可疑結(jié)果(5頭)和陽性結(jié)果(13頭)在感染后第13天出現(xiàn),隨后抗體陽性豬數(shù)量和抗體阻斷率穩(wěn)定增加(增大)。到了第29天,所有C型豬抗體顯示陽性(阻斷率在74-98%),到了第63天,所有C型豬阻斷率達到99-100%。存活的C型豬直到實驗結(jié)束仍表現(xiàn)陽性,但是產(chǎn)生的抗體是ASFV p73蛋白特異性的抗體,但不能產(chǎn)生有中和作用的抗體。
6頭S型豬從實驗開始至結(jié)束,未表現(xiàn)非瘟感染臨床癥狀,qPCR檢測、HAT檢測和ELISA檢測結(jié)果均呈陰性,表明在第99天,S型豬和感染非瘟后存活C型豬混養(yǎng),C型豬已不具備感染能力。
綜上,中等毒性的Netherlands’86毒株感染后的豬只在4-6天內(nèi)既出現(xiàn)臨床癥狀,并且嚴重程度各異,包括急性致死、延遲致死、慢性病癥,以及最終恢復(fù)等。在感染幾天(最早3天)后便出現(xiàn)病毒血癥,可通過PCR、HAT試驗等方法檢測,同時開始出現(xiàn)排毒,第3天口腔及唾液中就可檢測病毒,糞便中稍晚;ASFV抗體(p73特異性抗體)出現(xiàn)更晚。然而存活下來的感染豬只并不會長期帶毒,而是隨著時間的推移,病毒載量逐漸降低,并最后完全清除。HAT試驗陰性結(jié)果最先出現(xiàn),隨后qPCR結(jié)果也將轉(zhuǎn)為陰性,健康豬只與感染99天后的存活感染豬混養(yǎng)也不會出現(xiàn)感染。但存活下來的感染豬并不會產(chǎn)生有效的中和抗體。
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