“相比于豬瘟、藍(lán)耳凈化，真正有措施、有方案、有手段的還是豬偽狂犬病凈化。如今萬事俱備，做就行?！?0月20日，國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心主任田克恭在第八屆李曼中國養(yǎng)豬大會上介紹了《豬偽狂犬病防控與凈化新技術(shù)》。

國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心主任田克恭

7年精心打磨，變異株豬偽狂犬滅活苗為凈化助力

2011年底豬偽狂犬病毒變異，我國許多免疫豬場相繼發(fā)病，大部分發(fā)病場豬群出現(xiàn)典型偽狂犬病臨床癥狀，gE抗體陽性率接近100%。部分豬場僅發(fā)現(xiàn)gE抗體陽性率上升但未見發(fā)?。籫B抗體陽性率偏低。感染豬偽狂犬病的豬解剖可見脾臟梗死、腦補淤血、肺臟實變等。

豬只感染變異株偽狂犬病毒后，給豬只免疫原有的偽狂犬疫苗還能不能起到很好地保護作用？田克恭表示，經(jīng)典毒株疫苗不能完全保護變異毒株。偽狂犬的變異毒株出現(xiàn)后，幾乎再也見不到偽狂犬經(jīng)典野毒。

據(jù)了解，2012年1月國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心成功分離出豬偽狂犬變異毒株—HN1201。隨后，田克恭率領(lǐng)團隊進行研發(fā)，利用基因重組技術(shù)，構(gòu)建出gE基因缺失的滅活疫苗株（HN1201-ΔgE株）。2015年4月21日，該疫苗獲得中國人民共和國農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的臨床試驗批件；2019年1月22日，獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村部頒發(fā)的新獸藥注冊證書；2019年4月15日，獲得農(nóng)業(yè)農(nóng)村部頒發(fā)的獸藥產(chǎn)品批準(zhǔn)文號批號。經(jīng)過七年時間的精心打磨，國內(nèi)首個針對豬偽狂犬病變異毒株的滅活疫苗——普偽凈正式誕生。

會議現(xiàn)場

普偽凈對豬偽狂變異和經(jīng)典毒株均可完全保護

“缺gE的目的是為了鑒別診斷，研究滅活苗的目的就是為了凈化?！碧锟斯П硎?，病毒變異后，做成滅活苗產(chǎn)生中和抗體非常高。普偽凈的誕生為豬偽狂犬病凈化增加砝碼。

據(jù)田克恭介紹，該疫苗具有四大特點：

1、國內(nèi)第一個針對豬偽狂犬病變異株的滅活疫苗，對豬偽狂犬病變異毒株和經(jīng)典毒株均可產(chǎn)生完全的保護力；

2、國內(nèi)第一個采用基因工程手段缺失gE基因的滅活疫苗，有利于豬偽狂犬病的凈化和根除；

3、疫苗免疫后2周即可產(chǎn)生高水平的中和抗體，且抗體持續(xù)時間至少4個月以上，可有效阻止野毒感染及gE抗體轉(zhuǎn)陽；

4、采用進口雙相復(fù)乳佐劑，安全性高無免疫副反應(yīng)。

豬偽狂犬滅活疫苗（HN1201-△gE株）與同類產(chǎn)品（包括進口的、國產(chǎn)的，滅活苗與活疫苗）相比較，無論是gB抗體轉(zhuǎn)陽的時間，還是抗體出現(xiàn)的高低，持續(xù)時間長短，都明顯優(yōu)于原來經(jīng)典毒株的活苗和滅活苗。PRV滅活疫苗（HN1201-△gE株）免疫組攻毒后體溫穩(wěn)定，無明顯升高。

PRV gE/gD抗體聯(lián)檢生物芯片提高效率4-8倍

要想凈化豬偽狂犬病，除了擁有好的疫苗外，還需要免疫效果評價的試劑盒和感染免疫鑒別的試劑盒。據(jù)田克恭介紹，普泰生物試劑盒的特異性、敏感性與穩(wěn)定性值得信賴。在檢測gE抗體方面，普泰生物與愛德士作對比實驗，結(jié)果表明普泰的試劑盒5-7天就能檢出gE抗體，早期檢測更靈敏；在檢測gB方面（免疫效果評價），普泰生物也與BioChek的試劑盒作對比實驗，符合率可達(dá)到95%。

田克恭表示，業(yè)內(nèi)普遍用gB作抗原來檢測免疫保護抗體，后來實驗發(fā)現(xiàn)，豬偽狂犬變異毒株gB和gC的中和抗體都不是很高，gD的中和效價有20多，gD蛋白是最重要的免疫保護相關(guān)性蛋白，更能反應(yīng)出打苗之后的免疫情況，可以更準(zhǔn)確的制定免疫程序。因此，在豬偽狂犬的免疫效果評價方面可以直接檢測gD，不檢測gB。

移動實驗室結(jié)果識讀并出具檢測報告

以往檢測豬偽狂犬病毒的gE和gB，需要兩種試劑盒，做兩次。田克恭介紹，為了省時省力，方便快捷，洛陽中科芯片公司改變原有的檢測方式，研發(fā)出一種PRV gE/gD抗體聯(lián)檢生物芯片，競爭ELISA原理，一個樣品，一次檢測，獲得兩個及以上指標(biāo)的檢測結(jié)果。其核心競爭力是采用改性硅膠膜作新型免疫學(xué)診斷載體，實現(xiàn)“零背景”，保證特異性；探針三維展示，提高敏感性；多指標(biāo)檢測，實現(xiàn)高通量、自動化操作。檢測結(jié)果與手機APP相連，讀取數(shù)值，上傳到云端，再生成報告。這種方法既保證了檢測精準(zhǔn)度與穩(wěn)定性，與傳統(tǒng)的ELISA檢測方法相比，效率提高了4-8倍。

現(xiàn)場講解操作過程

普萊柯在李曼大會現(xiàn)場的展位